DTNB
化学物质
DTNB是5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)) 的简称。一方面它和碳酸氢钠以一定的比例而混合后用作产物乙酰胆碱显色剂,显黄色,通常用于农残检测,它吸光度来反映酶的抑制率值,最终用来初步判断农药是否超标。另一方面常用于检测游离的巯基(-SH),此时也称作Ellman试剂。
基本物化信息
性状:类白色或黄色粉末。微溶于乙酸和水。(分解)。有刺激性。
贮存:阴凉干燥处保存;储存温度2-8°C
用途:有机磷农药中毒的监测(胆碱酯酶测定)。 0.5mM-5mM可以灭活细胞表面的离子通道,2mM-5mM可以使细胞表面的二硫键异构酶(PDI)失活,DTNB本身不能通过细胞膜。
制备
在Ellman的原始论文中,他通过氧化2-硝基-5-氯苯甲醛成羧酸,经与硫化钠反应引入巯基基团,进一步利用碘氧化两个单体耦合。今天这种试剂可以在市场上买到。
Ellman测试
含巯基化合物可以与DTNB反应,断裂DTNB的二硫键产生2-硝基-5-硫代苯甲酸(NTB-),若在中性或碱性pH条件下的水中可以离子化,生成NTB2-二价阴离子。这种NTB2-离子呈现黄色。
DTNB与一种巯基化合物(R-SH)的反应
这个反应迅速且定量,加入1摩尔的巯基可以释放1摩尔的NTB。通过测定在412nm可见光吸光度就可以定量NTB2-,在稀释的缓冲溶液消光系数为14150M-1,在高盐浓度的溶液中(比如6M的盐酸胍或者8M的尿素)消光系数为13700M-1。最近发表的论文指出,1959年原始论文所确定的稀溶液中的消光系数被低估了,为13600M-1。
Ellman试剂可以用于测定低分子量的巯基化合物,比如在纯溶液和生物样品(如血液)中测定谷胱甘肽(GSH)。它也可以测定蛋白质上巯基的基团的数目。
参考资料
最新修订时间:2024-06-01 11:32
目录
概述
基本物化信息
制备
Ellman测试
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