DTNB是5,5'-二硫代双(
2-硝基苯甲酸)(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)) 的简称。一方面它和
碳酸氢钠以一定的比例而混合后用作产物
乙酰胆碱的
显色剂,显黄色,通常用于农残检测,它吸光度来反映酶的抑制率值,最终用来初步判断农药是否超标。另一方面常用于检测游离的巯基(-SH),此时也称作Ellman试剂。
在Ellman的原始论文中,他通过氧化2-硝基-5-氯苯甲醛成
羧酸,经与
硫化钠反应引入巯基基团,进一步利用碘氧化两个单体
耦合。今天这种试剂可以在市场上买到。
含巯基化合物可以与DTNB反应,断裂DTNB的
二硫键产生2-硝基-5-
硫代苯甲酸(NTB-),若在中性或碱性pH条件下的水中可以离子化,生成NTB2-二价阴离子。这种NTB2-离子呈现黄色。
这个反应迅速且定量,加入1摩尔的巯基可以释放1
摩尔的NTB。通过测定在412nm
可见光吸光度就可以定量NTB2-,在稀释的
缓冲溶液中
消光系数为14150M-1,在高盐浓度的溶液中(比如6M的
盐酸胍或者8M的尿素)消光系数为13700M-1。最近发表的论文指出,1959年原始论文所确定的
稀溶液中的消光系数被低估了,为13600M-1。
Ellman试剂可以用于测定低分子量的巯基化合物,比如在纯溶液和生物样品(如血液)中测定
谷胱甘肽(GSH)。它也可以测定蛋白质上巯基的基团的数目。