T4多核苷酸激酶能够催化磷酸在g-位和双链/单链DNA或RNA的5'-羟基末端以及3'-单磷酸核苷间进行转移和交换：5'-OH +NTP<=>5'-P+NDP。该酶还具有3'磷酸酶活性，将3'-磷酸基团从寡核苷酸的3'磷酸末端、脱氧3'-单磷酸核苷和脱氧3'-二磷酸核苷上水解掉。

该

附译：

T4多核苷酸激酶能够催化Pi在ATP的γ位置和多核苷酸（单链、双链的DNA、RNA）5’羟基末端和核苷3’单磷酸核苷之间的转移与交换。也能够催化3’磷酰基多核苷酸、脱氧核糖核苷3’单磷酸和脱氧核糖核苷3’二磷酸中3’磷酸基团的去除水解。