western印迹法
Southern印迹法后的类似方法
Western印迹法是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,然后通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印到固相支持物上。
简介
蛋白质经单向电泳后分离后被转移到硝酸纤维滤膜上,然后用放射性酶标记的特异抗体来检测相应抗原的存在。
蛋白质印迹技术是1975年Southern建立了Southern印迹法后,人们用类似的方法对蛋白质进行印迹分析,称为Western印迹法。
检测原理
固相支持物包括NC(硝酸纤维素)膜、尼龙膜PVDF聚偏氟乙烯)膜等。通常使用的PVDF膜的规格是0.45 μm,如果靶蛋白的分子量小于10KD,则选用0.22μm的PVDF膜。转膜的的方式有湿转和半干转。用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与膜进行杂交,使抗体与靶蛋白特异性结合后,再与经辣根过氧化物标记的二抗结合,最后用ECL试剂反应,经X线片曝光、显影等一系列反应,达到检测靶蛋白的目的。
参考资料
最新修订时间:2023-03-24 18:43
目录
概述
简介
检测原理
参考资料