pUC18是适合于
双脱氧法
DNA测序的
载体,通常运用于
重组dna的
分子克隆中,首先我们制备
大肠杆菌的
感受态细胞(能接受外来重组的dna),这种
感受态菌株必须不同外来
DNA分子发生
遗传重组,通常是rec基因缺陷型的突变体,同时它们必须是限制系统缺陷或限制与
修饰系统均缺陷的菌株,即具有这三种缺陷(rk mk rec ),同时对
氨苄青霉素敏感(ap)。
puc18载体自身带有抗氨苄青霉素基因,而
外源片段不具有,这样只有带有puc18的
转化子的菌株才能在
氨苄青霉素平板上存活,而外源片段自身环化的不能存活,这称为抗性筛选。
pUC18 上带有
β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的
调控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 个
氨基酸的
编码序列,在这个
编码区中插有一个
多克隆位点,且不影响正常功能,DH5α
感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息,当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后,互补表达有活性的β-半乳糖苷酶,称为
α-互补现象,当有外源片段插入多克隆位点后,不能产生互补,即细菌不能产生β-半乳糖苷酶活性。在呈色底物
X-gal(5-溴-4-氯-3-
吲哚-
β-半乳糖苷酶)和
诱导物IPTG(
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的存在下,互补产物
菌落呈现蓝色,不互补产物菌落呈白色,很容易鉴别,这种筛选方法称为α-互补现象筛选(
蓝白斑筛选)。由上可见,puc18载体除了能重组导入外源片段外,在筛选表达过程中还具有重要的作用