七叶灵水解试验（Bile Esculin Test）是微生物生化鉴定试验的一种，其原理是依据待检测的细菌是否具有水解七叶灵的能力。阳性反应主要用于鉴别D群链球菌和肠球菌（Enterococci），例如粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）和牛链球菌（Streptococcus bovis）等。

微生物在生长代谢七叶灵的过程中会产生深棕色的代谢产物七叶甙原（esculetin）产生可观察的颜色反应。七叶灵水解试验呈阳性的微生物可以裂解七叶灵分子，释放出葡萄糖分子和七叶甙原。其中葡萄糖分子被微生物利用，作为碳源供能，而七叶甙原分子与培养基中的三价铁离子反应形成黑色的酚醛铁复合物（ phenolic iron complex）使培养基变色。

七叶灵水解试验常依靠商业化的胆汁七叶苷琼脂（bile esculin agar）完成。其中的胆汁成分可以抑制除了D群链球菌和肠球菌以外的其他革兰氏阳性菌生长，如果额外添加叠氮化钠，还可以抑制革兰氏阴性细菌的生长。

1、将纯化的菌落或培养纯化菌落得到的菌液，划线接种到含有胆汁七叶苷琼脂的斜面培养基上（不必穿刺培养）。

2、在35~37℃培养24小时，即可进行结果观察。

3、若菌落生长茂盛，则判定为胆汁抑制生长（growth in the presence of bile）结果阳性。

4、若培养基呈现深棕色颜色变化，则判定为七叶灵水解试验阳性。