体视荧光显微镜是显微镜的一种,通常用于生物、工业检测等领域。
定义
使用范围:主要广泛应用于生物、工业检测、司法刑侦等领域,既是荧光防伪印刷检测的必备工具,也是矿物研究的理想仪器。
所属学科:
机械工程(一级学科) ;
光学仪器(二级学科) ;显微镜-
显微镜名称(三级学科)
简述
荧光
体视显微镜是活体动物体内荧光成像技术的核心技术,它主要广泛应用于生物、工业检测、司法刑侦等领域,既是荧光防伪印刷检测的必备工具,也是是矿物研究的理想仪器。
使用方法
(2)开启荧光显微镜稳压器,然后按下启动组点燃紫外灯15min内不得关闭,关闭后3min内不得再启动。
(3)将激发滤光片转至v,分色片调到v,选用495或475nm阻挡滤光片。
(4)选用uvFL40、uvFL100荧光接物镜镜检。
(5)在玻片上加无荧光油,先用40x,再用100x调焦镜检,呈现荧光。
(7)因荧光物质受紫外光照射时随时间的增长荧光逐渐变弱,因此镜检时应经常变换视野。
(8)亦可用uvFL10或uvFL20低倍镜镜检材料(用低倍镜时不加无荧光油)。
注意事项
1. 显微镜的灯箱打开后,表面会变得非常的热。请留意在灯箱附近留出足够的空间(10cm以上)。
2. 安装显微镜时,请取下电源线。请勿让电源线直接接触灯箱以免造成短路。
3. 更换灯泡时,请先关闭电源,并待灯泡冷却(20分钟)后,才能取下灯泡。
分类及镜检术
荧光显微镜是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。荧光显微镜广泛应用于生物等领域。
(1)荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型:
透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则会变暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难以确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不适用于非透明的被检物体。
落射式:透射式几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用,不仅便于操作,而且从低倍到高倍,可以实现整个视场的均匀照明。
(2)荧光镜检术的注意事项:
a.激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象,因此尽可能缩短观察时间,在不观察时,应用挡板遮盖激发光。
c.荧光几乎都较弱,应在较暗的室内进行。
d.电源最好装稳压器,否则电压不稳,不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。
许多新兴生物研究领域应用到荧光显微镜,如基因原位杂交(FISH)等等。
荧光图像的记录
荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上可靠的。随着技术科学的发展,在不同程度上采用客观指标记录判断结果,如用细胞
分光光度计、
图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果,也必须结合主观的判断。
荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片如ASA200以上或24o以上。因紫外光对荧光猝灭作用大,如FITC的标记物,在紫外光下照射30s,荧光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。
产品配置