此菌难于
培养；最初只在含死的
结核杆菌或其他死的
抗酸细菌上生长。少数培养适应于不加死细菌的
合成培养基。培养基内加入分枝杆菌纯化提取物即可不需要加入死的抗酸细菌而生长。
分枝杆菌素(mycobactins)是由不同分枝杆菌的种衍生而来的一族铁螯合生长因子。在含有热杀死的
草分枝杆菌的甘油琼脂上4—6周后有刚看得出来的菌落，微白色、隆起、圆形。
在含热杀死草分枝杆菌的甘油蛋培养基上，4—6周后，菌落细小、微白色、隆起、圆形，边缘薄，略不规则。老的菌落变为更隆起、有放射条纹或不规则褶叠，暗淡黄白色。在含羊脑和热杀死草分枝杆菌的甘油蛋培养基上生长略较丰茂。分离自患
慢性腹泻(约翰病)的牛的肠粘液。显然是自然界的严格寄生菌。从羊分离出的菌株比从牛分离出来的更难于培养。
在牛和羊上产生“约翰病”。在山羊上实验产生相似的疾病。豚鼠、家兔、大鼠和小鼠不发病。很大的剂量在实验室动物上产生轻度结节局部病变，与草分枝杆菌所引起者相类似。像结核菌素那样制备的约翰菌素(johnin)在牛内与约翰病产生阳性反应。有人报道与患结核病的动物也发生反应。对鸟结核菌素敏感化的动物对约翰菌素也起反应，鸟结核菌素在一些感染约翰氏菌的动物内引起反应。