反竞争性抑制是指抑制剂不直接与游离酶相结合，而仅与酶-底物复合物结合形成底物-酶-抑制剂复合物，从而影响酶促反应的现象。

如图1，E为酶（enzyme），S为底物（substrate），P为产物（product），I为抑制剂（inhibitor），ES为酶-底物复合物（enzyme-substrate compound），ESI为酶-底物-抑制剂复合物（enzyme-substrate-inhibitor compound）。当抑制剂不在体系内时，酶与底物正常结合形成酶-底物复合物并进一步转变为游离酶与产物，遵循一般的单底物米氏反应动力学。

当反应体系存在抑制剂时，反应平衡向酶-底物复合物生成的方向移动，但是抑制剂与酶-底物复合物进一步生成酶-底物-抑制剂三元复合物，而该三元复合物无法转变为游离酶和产物，故这一过程对酶促反应有抑制作用。

抑制剂存在时，对米氏方程的修正为：

V0=Vmax[S]/(Km+α'[S])

α'=1+[I]/Ki

由上述式知，反竞争性抑制剂会改变酶对底物的Km，Km减小。在底物浓度较低时，[S]≪Km，V0=Vmax[S]/Km，反应为关于底物浓度的一级反应；而在底物浓度高时，[S]≫Km，V0=Vmax/α'，减小了反应理论的最大速率Vmax，表现为“酶量减少”。

双倒数作图处理为：

1/V0=(Km/Vmax)×(1/[S])+1/Vmax×(1+[I]/Ki)

详见《生物化学原理》杨荣武等，2012.