在转基因研究中,单独一个包含启动子、编码区和终止子的基因,或者组成基因的某个原件,一般是不容易进入
受体细胞的,即使采用理化方法进入细胞后,也不容易在受体细胞内稳定维持。目的基因能否有效转入受体细胞,并在其中维持和表达,在很大程度上取决于克隆载体。作为基因克隆载体一般具有以下条件。
1、在克隆载体合适的位置必须含有允许外源基因插入的克隆位点,并且这样的克隆位点应尽可能的多。但是对于某种克隆位点来说,在克隆载体上一般只有一个。为了便于多种类型的DNA片段的克隆,克隆载体中往往组装一个含
多克隆位点的连杆。
2、克隆载体一般能在携带外源DNA片段进入
受体细胞后,或停留在细胞质中进行自我复制;或整合到
染色体DNA、线粒体DNA或叶绿体DNA中,随着这些DNA的复制而同步复制;或自成染色体而和其他染色体一样自我复制。如果要求克隆载体中的外源基因在受体细胞中能有效表达,克隆载体必须含有使外源基因得以表达的各种元件,构建成
基因表达载体。
3、克隆载体必须含有供选择转化子的标记基因或报道基因。例如,根据转化子抗药性进行筛选的
氨苄西林抗性基因、氯霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、链霉素抗性基因、四环素抗性基因等,根据转化子蓝白颜色进行筛选的β-半乳糖苷酶基因,以及表达产物容易观察和检测报道的报道基因gus(β-葡萄醛酸苷酶基因)、gfb(绿色荧光蛋白基因)等。