酯与羟胺作用可生成异羟肟(wò)酸，再与三氯化铁作用即生成呈紫红色或红色的异羟肟酸铁。这是识别酯类化合物与其他类型化合物的一种常用的方法。

异羟肟酸铁反应用于氟乙酰胺定性检验的原理为， 在碱性条件下氟乙酰胺与羟胺反应生成异羟肟酸， 进一步与高铁离子反应生成紫色异羟肟酸铁络合物。经中毒流行病学调查， 对疑为含有氟乙酰胺检材的甲醇提取浓缩液， 加入盐酸羟胺， 用氢氧化钠调成碱性， 加热沸腾， 冷后用盐酸调 pH 3-4，滴加三氯化铁溶液， 如有氟乙酰胺存在， 则显紫红色。

酯与羟胺作用可生成异羟肟酸，再与三氯化铁作用即生成红色的异羟肟酸铁：

R—COO—R' + NH2OH→R—CONHOH (异羟肟酸) + R'—OH

R—CONHOH + FeCl3→（R—CONHO）3Fe(异羟肟酸铁) + 3HCl

羧酸衍生物均能进行上述反应，这是识别这类化合物与其他类型化合物的一种常用的方法。

取样品乙醇液1ml，加新鲜的1mol/L盐酸羟胺甲醇液0.5ml、6ml/L氢氧化钾甲醇液0.2ml，加热至沸，冷后加5%盐酸酸化，最后加1%三氯化铁溶液1~2滴，显紫红色。

用于鉴别内酯（酯类、香豆素类等），分子中具有酯结构，碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下加三氯化铁即呈紫红色或红色的异羟肟酸铁。