李妮因受到家庭的熏陶，从小便开始学习小提琴、二胡等乐器。1981年，17岁的李妮跟随父亲
李文化观看了多部改革开放后引进的国外电影，她也第一次感受到电影的魅力。此后，父亲请来了
都郁做她的启蒙老师。在都郁老师的指引下，李妮于1982年考入了中央戏剧学院导演系。1986年，担任戏曲电影《
芙蓉女》的助理导演。
1990年，与李文化共同执导由
黄国强、
杨凤一合作主演的武侠电影《
索命逍遥楼》。1991年，与李文化联合执导由
刘红梅、
王文升等合作主演的古装电影《
落花坡情仇》。1992年，执导喜剧电影《初吻》，这是李妮独立执导的首部电影；同年，与李文化共同执导枪战动作电影《
黑雪》。
1993年，由其自编自导的反毒题材电影《
黑火》上映。1995年，执导由
陆剑民、
祁艳、
谢昀杉联合主演的战争剧《
太行山突围》。2000年，执导由孙淳、
何冰等共同主演的爱情剧《
真情到永远》；同年，执导以优秀共产党员事迹改编的纪实剧《
以时代的名义》中的单本剧《正义是美丽的》，该剧获得金剑奖最佳短片电视剧奖、金鼎奖最佳短片电视剧奖。
2005年，与
鲁冬青联合执导青春剧《青春冲动》。2008年10月，由李妮执导，李佳、
孙松合作主演的情感剧《
相逢在雨后》在央视一套播出。2009年，执导由
果静林、
林熙越共同主演以书法为主题的剧情电影《
墨香天使》。2010年，执导由
冯绍峰、孙松等共同主演的都市言情剧《
小城大爱》。
2012年，由其执导的当代都市剧《
老爹的非“城”勿扰》播出，该剧获得第5届新农村电视艺术节农村题材电视剧三等奖。2014年，执导由
陈志朋、
罗立群等联合主演的爱情电影《
第一眼爱情》，该片入围澳门国际电影节最佳故事片奖；同年，执导由
李幼斌、
李菁菁等联袂主演的当代都市剧《
爱的保镖》。
2017年7月，由李妮执导，
袁咏仪、
丁海峰、
胡杏儿等联合主演的都市情感剧《
领养》播出，该剧获得第12届中美电影节优秀中国电视剧金天使奖。2018年3月，由其执导的都市剧《
新万家灯火》首播，该剧由
李泰、
刘雅瑟合作主演；同年，执导由
刘奕君、
倪大红合作主演的犯罪剧《
无处躲藏》。
李妮擅长运用镜头刻画人物内心的情感，其对女性题材的思索琢磨能为电视剧增色加分。而且，她有着不怕累的精神和谦虚的学习态度，执导的作品类型也非常广泛，有枪战片、动作片、言情片等，她在不断的艺术实践中摸索自己的风格，形成了自己独具一格的影片风格，用实际行动打破了一些业内人士对女性导演的质疑。她跟男导演是不一样的，她以深邃、自然、流畅、细腻的表达方式见长，并能以女性导演特有的观察力和鉴赏力赋予影片更为生动的灵魂（腾讯网、齐鲁晚报综合评）。