核苷酸酶（nucleotidase）是指水解核苷酸的糖和磷酸间的键而生成无机磷酸和核苷的特异的磷酸酯酶。

5′-核苷酸酶（EC3．1．3．5）可作用于腺苷（次黄苷）-5′-磷酸，而对3′-磷酸则无作用。含于前列腺、精液、脑、网膜、蛇毒、马铃薯、酵母和大肠杆菌中。除大肠杆菌的胞周腔（periplasmic space）中存在这种酶可作为典型例子以外，在高等动物细胞中，通常也是与膜结构相结合而存在。3′-核苷酸酶（EC3．1．3．6）可以水解腺苷-3′-磷酸等，存在于麦芽、马铃薯和枯草杆菌中。

一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。又称核甙酸。戊糖与有机碱合成核苷，核苷与磷酸合成核苷酸，4种核苷酸组成核酸。核苷酸主要参与构成核酸，许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能，如与能量代谢有关的三磷酸腺苷（ATP）、脱氢辅酶等。某些核苷酸的类似物能干扰核苷酸代谢，可作为抗癌药物。根据糖的不同，核苷酸有核糖核苷酸及脱氧核苷酸两类。根据碱基的不同，又有腺嘌呤核苷酸（腺苷酸，AMP）、鸟嘌呤核苷酸（鸟苷酸，GMP）、胞嘧啶核苷酸（胞苷酸， CMP）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸，UMP）、胸腺嘧啶核苷酸（胸苷酸，TMP）及次黄嘌呤核苷酸（肌苷酸，IMP）等。核苷酸中的磷酸又有一分子、两分子及三分子几种形式。此外，核苷酸分子内部还可脱水缩合成为环核苷酸。

核苷酸是核糖核酸及脱氧核糖核酸的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。核苷酸随着核酸分布于生物体内各器、组织、细胞的核及胞质中，并作为核酸的组成成分参与生物的遗传、发育、生长等基本生命活动。生物体内还有相当数量以离形式存在的核苷酸。三磷酸腺苷在细胞能量代谢中起着主要的作用。体内的能量释放及吸收主要是以产生及消耗三磷酸腺苷来体现的。此外，三磷酸尿苷、三磷酸胞苷及三磷酸鸟苷也是有些物质合成代谢中能量的来源。腺苷酸还是某些辅酶，如辅酶Ⅰ、Ⅱ及辅酶A等的组成成分。

安芬森(美国人)确定了核糖核苷酸酶的分子氨基酸排列 S.莫尔，W.H.斯坦(美国人)从事核糖核苷酸酶的活性区位研究。首先，核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸都属于核苷酸。核糖核苷酸： 腺嘌呤核糖核苷酸（A）、鸟嘌呤核糖核苷酸（G）、胞嘧啶核糖核苷酸（C）、尿嘧啶核糖核苷酸（U）；脱氧核糖核苷酸： 腺嘌呤脱氧核糖核苷酸（A）、鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸（G）、胞嘧啶脱氧核糖核苷酸（C）、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（T） 共八种。

含氮碱基只有五种： 腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T）、尿嘧啶（U），而DNA分子中不含尿嘧啶（U），RNA分子中不含胸腺嘧啶（T）。所以，腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）都可形成核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸（有6种核苷酸了），再加上RNA分子中的尿嘧啶核糖核苷酸（U）和DNA分子中的胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（T）（共2种核苷酸） 一共8种。