氨基酸分析仪,是指用于测定
蛋白质、肽及其他
药物制剂的
氨基酸组成或含量的方法。进行
氨基酸分析前,必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸。它是基于阳离子交换柱分离、柱后
茚三酮衍生、光度法测定的
离子交换色谱仪。氨基酸分析仪由
色谱柱、
自动进样器、
检测器、
数据记录和处理
系统组成。氨基酸分析仪的基本原理为
流动相(
缓冲溶液)推动
氨基酸混合物流经装有
阳离子交换树脂的色谱柱,各氨基酸与树脂中的
交换基团进行离子交换,当用不同的pH缓冲溶液进行洗脱时因交换能力的不同而将氨基酸混合物分离,分离出的单个氨基酸组分与
茚三酮试剂反应,生成紫色化合物或黄色化合物,用
可见光检测器检测其在570 nm、440 nm的
吸光度。这些有色产物对应的
吸收强度与洗脱出来的各氨基酸浓度之间的关系符合
朗伯-比尔定律。据此,可对氨基酸各组分进行定性、定量分析。氨基酸分析仪也可利用
阴离子交换分离后经积分脉冲安培法检测,该检测方法无需将待测氨基酸进行柱前或柱后衍生。
仪器
基本结构同普通
HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如
氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)
通常细分为两种系统:
蛋白水解分析系统(钠盐系统)和
游离氨基酸分析系统(
锂盐系统),利用不同浓度和pH值的
柠檬酸钠或
柠檬酸锂进行
梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线
平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。
分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(最低
检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:<0.5 pmol;氨基酸分析仪:<10 pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。
1、原理。基于阳离子交换柱分离、柱后
茚三酮衍生、光度法测定的
离子交换色谱法(IEC)。此类方法由Stein和Moore两人1958年发明,并于1972年获
诺贝尔奖,是当今
国际标准和
国家标准以及仲裁和涉外的方法。
2、重要指标。满足分析需要的
技术指标如
分离度、
重复性等要求,而其中的分离度又是更为重要的指标,因为,色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提,只有峰分开了,才有意义去讨论定性和定量的重复性。
3、指标的真实性。有些厂家只标出个别
氨基酸的指标如Asp或Arg,或只用平均数据替代全部数据等等,而仪器性能好,经营信誉较高的厂家就会标出全部氨基酸的指标供用户参考。
4、仪器的可靠性。如果仪器今天堵了、明天漏了,用户不仅要付出大量人力财力,
分析结果的
可信度也将大打折扣。
7、售后服务。
分析过程中遇到困难是在所难免,厂家必须能够
快速响应、尽快解决问题。另外,常用备件的价格也是一个重要因素,因为用户在购买前一般难以注意到售后的问题,而很多厂家也没有公示自己的常用备件价格,这就为将来的使用埋下了隐患,事实上,也的确有很多仪器在出现一些看似微小的故障之后,就因为维修费用太高而被“束之高阁”。