南京市汉口路小学创建于1933年，当时校名为“南京市汉口路中心国民学校”；1945年抗战胜利后，学校在原址复办；1949年4月南京解放后，学校更名为“南京市汉口路小学”；2024年5月，汉口路小学并入
南京市琅琊路小学，成为琅琊路小学汉口路校区。
抗战时期由于时局动机，学校一度停办。南京失陷后，学校与
金陵大学（
南京大学前身）、圣心医院（
南京市儿童医院身）并为“安全区”，著名《拉贝日记》中有专门介绍。抗战胜利后，学校得以复办。
党的
十一届三中全会后，学校抓住了
改革开放的机遇，加快发展。在上级关心下，重新规划校园布局，翻建校舍，添置现代化教学设备。先后建起电脑房，自然实验室，多功能教室。教师人人配备电脑，教室全部装置多媒体，大大优化了教学条件。学校建有足球场，篮球场，乒乓球活动区，综合器械活动区，为学生全面发展提供了有利条件。近9000平方米的校园里，梧桐绿荫如盖，紫藤攀援婆娑，棕桐挺拔，月季婀娜，红枫点缀，桂花溢香。2003年，学校被授予“江苏省绿色学校”称号。
学校以“让每个学生得到发展，使每位家长感到放心”为办学宗旨，以“培养健康的人，能干的人，会自我完善的人”为培养目标，坚持以热爱学生为跟本，以教科研为先导，全面推进各项工作。法制教育、科普教育两项特色受到省级表彰。“红领巾法学院”和“诺贝尔小小科学院”蜚声省内外。一批国家级、省市级课题的深入研究，大大提升了学校教育教学水平，教师数百篇论文分别获各级优秀奖。学校少先队工作，卫生保健室，图书阅览室、自然实验室均在市级验收评比中，获优秀等级。女子足球队在历届市运动会上屡获佳绩，名列前茅。
学校视质量为生命。始终抓住教师队伍的建设，拥有全国省市先进人物和省特级、市名师、区优青等教学骨干。学校强化了教学研究和质量监控的运行机制，特别着力于学生优良习惯的养成和学习能力的提高，成绩显著，受到广大家长、丰关中学及上级的肯定、赞誉。学校先后被授予“南京市规范化学校”、“南京市示范小学”、“南京市实验小学”、2005年，
江苏省教育厅又授予学校“江苏省实验小学”称号。