活化位点（英语：Active site），又称活化位置，是指一个酶中具有催化能力与结合位置的部位。

其结构与化学性质可辨识底物，并与底物结合。活化位置通常是酶表面上一个类似口袋的区域，内部含有可与特定底物发生反应的残基（氨基）。

底物与酶的结合通常有两种方式：锁钥匙模型和诱导锲合模型。锁钥匙模型中活化位点就是底物和酶结合特异性结合的特殊位点，经过特异性结合后，就不存在更深入的修饰作用。而在诱导锲合模型中，活化位点更为灵活，他的氨基残基促进酶与底物的特异性结合，并在结合过程中发生构象变化。