病料是从得病的动物(多为死后)身上采集的组织或器官,用来进行疾病的研究工作。
病料的采取
剖检前检查
凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等),急性死亡时,必须先用显微镜检查其末 梢血液抹片中是否有
炭疽杆菌存在。如怀疑是炭疽,则不可随意剖检,只有在确定不是炭疽时方可 进行剖检。
取材时间
内脏病料的采取,须于死亡后立即进行,最好不超过6h,否则时间过长,由肠内 侵人其他细菌,易使尸体腐败,影响病原微生物的检出。
器械的消毒
刀、剪、镊子、注射器、针头等煮沸消毒30min。器皿(玻璃制品、陶制品、珐 琅制品等)可用高压灭菌或干烤灭菌。软木塞、橡皮塞置于0.5%石炭酸水溶液中煮沸lOmin。采取 一种病料,使用一套器械和容器,不可混用。
病料采取
应根据不同的传染病,相应地采取该病常侵害的脏器或内容物。如败血
性传染病 可采取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、胃、肠等;肠毒血症采取小肠及其内容物;有神经症状的传 染病采取脑、脊髓等。如无法估计是哪种传染病,可进行全面采取。检查血清抗体时,采取血液 ,凝固后析出血清,将血清装入灭菌小瓶送检。为了避免杂菌污染,病变检查应待病料采取完毕后再进行。各种组织及液体的病料采取方法如下。
(1)脓汁 用灭菌注射器或吸管抽取或吸出脓肿深部的脓汁,置于灭菌试管中。若为开口的化脓 灶或鼻腔时,则用无菌棉签浸蘸后,放在灭菌试管中。
(2)淋巴结及内脏 将淋巴结、肺、肝、脾及肾等有病变的部位各采取1~2cm3的小方块,分别置 于灭菌试管或平皿中。若为供病理组织切片的材料,应将典型病变部分及相连的健康组织一并切取 ,组织块的大小每边约2cm左右,同时要避免使用金属容器,尤其是当病料供色素检查时(如马传贫 、马脑炎及焦虫病等),更应注意。
(3)血液
血清:以无菌操作吸取血液lOml,置于灭菌试管中,待血液凝固(经1~2天)析出血清后,吸出血清 置于另一灭菌试管内,如供血清学反应时,可于每毫升中加入5%石炭酸水溶液l~2滴。
全血:
采取lOml全血,立即注入盛有5%
柠檬酸钠lml的灭菌试管中,搓转混合片刻后即可。
心血:
心血通常在右心房处采取,先用烧红的铁片或刀片烙烫心肌表面,然后用灭菌的尖刃外 科刀自烙烫处刺一小孔,再用灭菌吸管或注射器吸出血液,盛于灭菌试管中。
(4)乳汁
乳房先用消毒药水洗净(取乳者的手亦应事先消毒),并把乳房附近的毛刷湿,最初所 挤的3~4股乳汁弃去,然后再采集10mi左右乳汁于灭菌试管中。若仅供显微镜直接染色检查,则可 于其中加入o.5%的福尔马林液。
(5)胆汁
先用烧红的刀片或铁片烙烫胆囊表面,再用灭菌吸管或注射器刺人胆囊内吸取胆汁, 盛于灭菌试管中。
(6)肠
用烧红刀片或铁片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔,持灭菌棉签插入肠内,以便采取 肠管粘膜或其内容物;亦可用线扎紧一段肠道(约6cm)两端,然后将两端切断,置于灭菌器皿内。
(7)皮肤
取大小约10cm×10cm的皮肤一块,保存于30%甘油缓冲溶液中,或10%饱和盐水溶液 中,或10%福尔马林液中。
(8)胎儿
将流产后的整个胎儿,用塑料薄膜、油布或数层不透水的油纸包紧,装入木箱内,立 即送往实验室。
(9)小家畜及家禽
将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中,装入木箱内,送往实验室。
(10)骨头
需要完整的骨头标本时,应将附着的肌肉和韧带等全部除去,表面撒上食盐,然后包 于浸过5%石炭酸水或o.1%升汞液的纱布或麻布中,装于木箱内送到实验室。
(11)脑、脊髓
如采取脑、脊髓作病毒检查,可将脑、脊髓浸入50%甘油盐水液中或将整个头部 割下,包人浸过o.1%升汞液的纱布或油布中,装入木箱或铁桶中送检。
供显微镜检查用的脓汁、血液及粘液,可用载玻片作成抹片,组织块可作成触片,然后在两块玻 片之间靠近两端边沿处各垫一根火柴棍或牙签,以免抹片或触片上的病料互相接触。如玻片有多张 ,可按上法依次垫火柴棍或牙签重叠起来,最上面的一张玻片上的涂、抹面应朝下,最后用细线包扎,玻片上应注明口码,并另附说明。
病料的保存
病料采取后,如不能立即检验,或需送往有关单位检验,应当加入适量的保存剂病料尽量保持新鲜状态。
1.细菌检验材料的保存 将采取的脏器组织块,保存于饱和的氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐水 溶液中,容器加塞封固。如系液体,可装在封闭的毛细玻管或试管运送。饱和氯化钠溶液的配制法 是:蒸馏水l00ml,氯化钠38~39g,充分搅拌溶解后,用数层纱布过滤, 高压灭菌后备用。30%甘油缓冲盐水溶液的配制法是:中性甘油30ml,氯化钠0.5g,碱性磷酸钠 1.0g,加蒸馏水至100ml,混合后高压灭菌备用。
2.病毒检验材料的保存 将采取的脏器组织块,保存于50%甘油缓冲盐水溶液或鸡蛋
生理盐水 中,容器加塞封固。50%甘油缓冲盐水溶液的配制法是:氯化钠2.5g,酸性磷酸 钠0.46g,碱性磷酸钠10.74g,溶于100ml中性蒸馏水中,加纯中性甘油150m1,中性蒸馏水50ml, 混合分装后,高压灭菌备用。鸡蛋生理盐水的配制法是:先将新鲜的鸡蛋表面用碘酒消毒,然后打 开将内容物倾人灭菌容器内,按全蛋9份加入灭菌生理盐水1份,摇匀后用灭菌纱布过滤,再加热至 56~58℃,持续30min,第2天及第3天按上法再加热一次, 即可应用。
3.病理组织学检验材料的保存 将采取的脏器组织块放人lo%福尔马林溶液或95%酒精中固定 ;固定液的用量应为送检病料的10倍以上。如用10%福尔马林溶液固定,应在24h后换新鲜溶液一 次。严寒季节为防病料冻结,可将上述固定好的组织块取出,保存于甘油和10%福尔马林等量混合 液中。
病料的运送
装病料的容器要一一标号,详细记录,并附病料送检单。病料包装容器要牢固,做到安全稳妥 ,对于危险材料。怕热或怕冷的材料要分别采取措施。一般病原学检验的材料怕热,应放人加有冰 块的保温瓶或冷藏箱内送检,如无冰块,可在保温瓶内放人氯化铵450~500g,加水1500ml,上层 放病料,这样能使保温瓶内保持0℃达24h。供病理学检验的材料放在10%福尔马林溶液中,不必冷藏。包装好的病料要尽快运送,长途以空运为宜。