祁白芷植物名称。该植物形态多年生草本,高1-2m,根圆锥形,直径2-5cm,茎粗壮中空,基部直径5-9cm,紫红色,近花序处有短柔毛。基生叶有长柄,基部叶鞘紫色。主产于
东北地区及山东,
河北等省。多生于河岸,溪边,多栽培。药用部位为根,药材白芷与祁白芷均来源于本种,夏秋季叶黄时采收。
【药材】:长圆锥形,长10-25cm,直径1.5-5cm,表面灰黄色至黄棕色,有多数纵皱纹及支根痕。有皮孔样的横向突起,习称“疙瘩丁”。
顶端有凹陷的茎痕,质硬,断面灰白色,粉性,气芳香,味辛,微苦。
【饮片】:圆形横切片,
直径1.5-2.5cm,厚2-3mm,切面类白色或灰白色,形成层环纹棕色,明显,圆形,木质部约占断面的1/3,具放射状纹理。
皮部有多数棕色油点,周边灰棕色或黄棕色。
【方法】:用12个随机引物对野生白芷、
杭白芷的4个居群超过17个个体的基因组DNA进行RAPD分析。结果:共扩增出40个位点,其中多态位点26个,占6.5%;祁、杭白芷的多态位点的百分率显示出低水平的
遗传变异。根据RAPDistance分析,祁、杭间的遗传距离(0.160)小于祁白芷居群内单株间和杭白芷不同居群间遗传距离,并且它们都小于野生白芷与祁、杭白芷间的遗传距离。
【结论】:祁、杭白芷应属同一类群,与野生白芷有一定区别。 关键词野生白芷祁白芷杭白芷RAPD种质分析白芷为常用中药。按国内用药历史和习惯,现代所用
商品药材均为栽培品,分为祁(禹)白芷和杭(川)白芷两大类,由于对其原野生植物来源尚未真正搞清,白芷类药材种名鉴定至今尚无统一的定论。据有关文献报道[1],祁禹白芷与分布于东北的兴安白芷(大活)为同种植物,定名为白芷Angelicadahurica(Fisch.)Benth.etHook.,而杭(川)白芷则分别作为独立种或共同作为白芷的变种,定名为A.dahurica(Fisch.)Benth.etHook.varformosana(Boiss)shanetYuan[2]。因此,我们对上述
兴安白芷、祁白芷、杭白芷三者进行了RAPD分析,探索相互间分子遗传关系和
分类地位,为正确划分白芷的种类提供依据。
1.1仪器PROGENETHERMALCYCLER(Techne公司,
英国);Micro-MB3616型高速离 心机(IEC公司,
美国);UV-Ⅰ型多功能紫外透射仪(
北京市新技术应用研究所)。
1.2试剂Taq酶(U-PBiotech.IncUSA);
琼脂糖(Promega公司);dNTPs(Promega公司);CTA(Sigma公司);澳化乙锭(Fluka公司);其余试剂为北京化工厂产的分析纯。
2.1DNA模板的提取和浓度测定取新鲜叶片少许,置1.5mlEp管中,加入
液氮用镊子研碎,立即加入500Ul保温60℃的2XCTAB提取液[CTAl32%,Tris一HCI(pH8.0)100mmol·L-1,EDTA20mmol·L-1,NaCl1.4mol·L-1,琉基乙醇2%]及20Ul琉基乙醇混匀,60℃保温40min;加入等体积的
氯仿-异丙醇(24:1)抽提,轻轻颠倒混匀,10000r·min-1’离心10min,吸取上清液,加入1/10体积的10%CTAB溶液,再加入等体积氯仿-
异丙醇(24:1)重复抽提1次,吸取上清液加入等体积的沉淀缓冲液[CTAB1%,Tris-HCI(pH8.0)50mmol·L-1,EDTA10mmol·L-1,琉基乙醇1%],室温下放置30min以上,10000r·min-1离心10min,小心去上清液,分别用70%乙醇和无水
乙醇各洗涤1次,弃掉洗液挥干。用
分光光度计测定DNA浓度后进行PCR扩增。所用引物编号及其序列见表2。2.2RAPD扩增反应体系总体积50UL,其中引物为lmmol·L-1’,总DNA约150ng,Taq酶
2U,dNTPs各0。05mmol·L-1。扩增程度为预变性5min,94℃40s,38℃45s,72℃45s40个循环,后延伸72℃5min。取10UL扩增产物于1.0%
琼脂糖凝胶上用1XTAE
电泳缓冲液电泳,紫外检测拍照(见图1)。