在用石蜡切片制作植物切片和组织切片时需用粘贴剂, 将切成的蜡带粘附在玻片上而且经染色和各种处理后要保证不脱落。常规切片染色用蛋白粘贴剂,明胶粘贴剂,火棉胶粘贴剂即可, 但在一些特殊组化染色, 如免疫组化往往经不起反复振荡洗涤、
胰酶消化等处理过程, 造成脱片, 影响观察与结果分析。为保证免疫组化实验的正常进行,要求在贴片前对载玻片作适当处理,必须在清洗干净的玻片上进行粘贴剂的处理以防脱片。
粘贴剂概述
配制方法,使用方法,粘贴剂
各种类型
明胶粘贴剂
1.1原料:明胶,蒸馏水,石碳酸,甘油
1.2化学成分分析
明胶(Gelatin):无味、无色,是一种半透明、坚硬的非晶态物,不溶于有机溶剂,吸水性强、粘度高,是肽分子聚合物质,是胶原蛋白质的水解产物,是一种无脂肪的高蛋白,且不含胆固醇,是一种天然营养型的食品增稠剂。组成
明胶的蛋白质中含有18种氨基酸,其中7种为人体所必需。除16%以下的水分和无机盐外,明胶中蛋白质的含量占82%以上,是一种理想的蛋白源。明胶的成品为无色或淡黄色的透明薄片或微粒。明胶不溶于冷水,但可缓慢吸水膨胀软化,明胶可吸收相当于其重量5—10倍的水。依据来源不同,明胶的物理性质也有较大的差异,其中以猪皮明胶性质较优,透明度高,可塑性强。
明胶可溶于热水,形成热可逆性凝胶,它具有极其优良的物理性质,如胶冻 力、亲和性、高度分散性、低粘度特性、分散稳定性、持水性。被覆性、韧性及可逆性等,因此明胶是一种重要的
食品添加剂,如作为食品的胶冻剂、稳定剂。增稠剂、发泡剂。乳化剂、分散剂、澄清剂等,被广泛应用。
1.2.2 石碳酸:
苯酚,又称石炭酸,可作消毒剂,常用的药皂就含苯酚,化学式C6H6O,苯环上带一个-OH
1.3配方
1.3.1溶液甲:明胶(粉状)1g + 100ml(36℃)
蒸馏水(明胶溶化后)+
石炭(结晶)2g +甘油15ml(溶化)
1.3.2溶液乙:甲醛(40%浓度)4ml+100ml 蒸馏水(即4%的福尔马林)
1.4配制方法
1.4.1 溶液甲:先将明胶溶于微温(36℃)的蒸馏水中,加入石炭酸和甘油,搅拌使其完全溶解。然后过滤,将滤纸贮存于有塞玻璃瓶中备用。
1.4.2 溶液乙:取甲醛(40%浓度)4ml,再加入100ml 蒸馏水,混匀(溶液乙的作用是对材料和明胶起到防腐作用)
1.5使用方法:使用时,在擦净的载玻片上滴上1/4-1/3滴溶液甲,用干净的手部将其涂抹均匀,再加大滴溶液乙,然后将蜡片放在液面上(蜡片的光面向下)。
蛋白粘贴剂
2.2化学成分分析
2.2.1甘油(glycerol): 甘油又名丙三醇,是一种无色、无臭、味甘的粘稠液体。用于气相色谱固定液及有机合成, 也可用作溶剂、气量计及水压机减震剂、软化剂、抗生素发酵用营养剂、干燥剂等。
2.2.2 麝香草酚:片状结晶,极易溶于乙醇、乙醚、醋酸、氯仿和苯,有百里香油似的辛香和草香香气,杀菌作用麝香草酚的杀菌作用比苯酚强,且毒性低,可做防腐剂。
2.3配方:新鲜鸡蛋青25ml + 甘油25ml + 石炭酸0.5g(为防腐剂)
2.4配制方法:将鸡蛋一端打开一个小孔,只让蛋白慢慢流入烧杯内。将鸡蛋清打成雪花状泡沫,然后用粗滤纸或双层纱布过滤到量筒中,经数小时或一夜即可滤出透明蛋白液。在其中加入等量甘油并轻轻摇动,使两者混合。最后加入少许
麝香草酚防腐,不用时需放低温干燥处(如冰箱中)保存,可保存6个月用蛋白粘贴剂时,切片染色后需将着色的粘贴剂痕迹擦去。
2.5使用方法:使用时,在擦净的载玻片上滴上小半滴蛋白粘贴剂,用干净的小指将其涂抹均匀,再加大滴水溶液,其他操作同明胶法。
2.6特点
2.6.1此剂在动物上应用更广,在植物上效果也很好
2.6.2粘性比明胶弱
2.6.3配好后1-2个月内易失效,所以一般是每次实验临时配
火棉胶粘贴剂
3.1原料:火棉胶,酒精(100%),乙醚
3.2化学成分分析
3.2.1火棉胶:
硝化纤维素的
无水乙醇和乙醚的混合溶液 ,为无色到淡黄色透明或微有乳色糖浆状液体,有醚的气味。
3.3配方:火棉胶1-2g,等体积无水酒精和
无水乙醚(适量)
3.4配制方法:火棉胶1-2g溶解在纯酒精和乙醚各半的混合液中,即为火棉胶粘贴剂
3.5使用方法:火棉胶粘贴剂滴在材料上,并使之干燥。染色时,可用石炭酸:甲苯(1:4)除去石蜡,再置入95%的酒精,顺次进行染色。
3.6特点:火棉胶粘贴剂适用于粘贴较厚的材料(如木材切片、种子切片等等)
APES
( 3- 氨丙基三乙氧硅烷)液
4.1原料:3- 氨丙基三乙氧硅烷,丙酮
4.2化学成分分析
3- 氨丙基三乙氧硅烷:为无色至淡黄色低粘度透明液体,是一种通用型
氨基硅烷,氨基具有与多种树脂反应的活性,而乙氧基水解后形成的硅羟基可与
无机材料表面的羟基缩合,从而在无机材料和树脂间架起“分子桥”,起到偶联的作用
4.3配方:APES ( 3- 氨丙基三乙氧硅烷)1ml,丙酮50ml
4.4 配制方法:取APES 1ml,加丙酮50ml,充分搅拌均匀备用
4.5使用方法:将清洁的载玻片放入APES液中20~30秒后,取出,用丙酮液洗去多余的APES液,注意不要留有气泡,置通风橱中晾干或60°C烤箱烤干。经该方法处理的玻片具有良好的防脱片能力。
4.6特点:APES 使用方便,便于大量应用,且价格便宜。为
免疫组织化学中,石蜡切片的常用粘贴剂。
Polv-L-Lysine
(多聚赖氨酸)液
5.2化学成分分析
Polv-L-Lysine (多聚赖氨酸):分子量30000左右,是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂,该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。
5.3配方: 多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)1ml,蒸馏水10ml
5.4配制方法:取市售Poly-L-Lysine 1ml,加入蒸馏水10ml,混匀,置于塑料容器中。
5.5使用方法:将清洁的玻片放入该液中5分钟,取出放置无尘干燥箱中晾干,或用60°C干燥箱烤干备用,所需容器不能用玻璃制品。经该方法处理的玻片具有很强的粘合能力。
5.6特点:粘合能力强,但价格较APES贵,为免疫组织化学技术中,石蜡切片的常用粘贴剂。
甲醛明胶液
6.1原料: 40%甲醛,明胶, 蒸馏水
6.2配方:40%甲醛 2.5ml , 明胶 0.5g , 蒸馏水 约80ml
6.3配制方法:将少许蒸馏水(约80ml)将明胶加热溶解,待完全溶解后,加甲醛,最后补充蒸馏水至100ml备用。
6.4使用方法:将清洁的载玻片置于甲醛明胶液液体中浸泡数分钟后,烤干备用。
6.5特点:为免疫组织化学技术中常用粘贴剂。
铬明胶溶液
7.1原料:铬明矾,明胶,蒸馏水
7.2化学成分分析
铬明矾:
硫酸铬钾,为紫色或紫红色等轴晶系八面体结晶,易制成大颗粒结晶。相对密度1.826(25℃)。熔点89℃。加热至100℃失去10个结晶水,加热至400℃时失去12个结晶水变成无水物。溶于水、稀酸,不溶于醇。溶于水中呈紫红色水溶液,加热至70℃时变成绿色溶液,冷却后渐变紫色。易吸潮,在干燥的空气中能风化。用作鞣剂, 媒染剂及照相定影剂等。
7.3 配方:铬明矾(chrome alum)0.25g,明胶(gelatine) 2.5g,蒸馏500ml
7.4 配制方法:先将铬明矾溶解于40°C少量蒸馏水中,再加入明胶及蒸馏水,可在70 °C水浴中使明胶溶化,搅拌均匀后,即可使用。如有残渣,可过滤后再用。
7.5使用方法:将清洁的载玻片置于甲醛明胶液液体中浸泡数分钟后,烤干备用,可防止脱片。
7.6特点:为免疫组织化学技术中常用粘贴剂