纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。

在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。

随着我国养殖业的发展以及整个养殖业管理水平的提高，纸片法药物敏感性试验逐渐被广大兽医人士所认可，许多养殖厂、户、兽医师都通过学习掌握了纸片法药物敏感性试验技术，并且很多兽医师在临床细菌感染性疾病的治疗过程中，都以药敏试验的结果来指导临床用药。纸片法药物敏感性试验已经在养殖业用药指导中起到了巨大的作用，该方法在临床中也已经被认为是一种最为权威的用药指导依据。然而，纸片法药物敏感性试验只是一种药物敏感性定性试验，在实验中容易受到诸多因素的影响，试验结果的评判也没有规定的标准，通过抑菌环的大小很难准确判断细菌对药物的敏感程度。临床中药物敏感性试验主要受到抗菌药物、培养基、细菌、试纸片以及培养条件等因素的影响。