美国职业棒球大联盟（Major League Baseball，简称美国职棒大联盟，或“MLB”），是美国最高级别的职业棒球联赛。

美国首场正式棒球比赛于1846年6月在纽泽西州的霍博肯举行。1869年，辛辛那提红袜队成为了美国第一支职业棒球俱乐部。1876年，芝加哥商人威廉·赫尔伯特创立了国家职业棒球俱乐部联盟（即后来的国家联盟），国家联盟最初有八支成员球队：波士顿红帽队（现亚特兰大勇士队）、芝加哥白袜队（现芝加哥小熊队）、辛辛那提红袜队、哈特福德深蓝队、路易斯维尔灰队、纽约互助队、费城运动家队以及圣路易斯棕袜队。

1901年，与国家联盟相抗衡的美国联盟成立。1903年，两大联盟达成协议，承认彼此的对等地位，并共同成立美国职棒大联盟。同年10月，首届世界大赛拉开帷幕。参赛双方分别是美国联盟的冠军波士顿美国人队（后更名为波士顿红袜队）和国家联盟的冠军匹兹堡海盗队。1904年，波士顿美国人队第二次夺得美国联盟冠军，并准备与国家联盟冠军纽约巨人队进行对决。然而，巨人队老板约翰·布拉什拒绝让他的球队参加与新成立的美国联盟冠军的比赛。

1921年，棒球比赛开始在电台上播出。这为无法亲临现场的人们提供了一种收听比赛的方式。1933年，首届大联盟全明星赛在芝加哥的科米斯基公园举行。由国家联盟明星队对阵美国联盟明星队。1936年，泰·柯布、沃尔特·约翰逊、克里斯蒂·马修森、贝比·鲁斯和霍纳斯·瓦格纳等球员入选首批美国职棒大联盟名人堂。1947年，纽约洋基队与布鲁克林道奇队的世界大赛首次通过电视转播。

20世纪50年代至60年代，美国职棒大联盟球队开始向西部迁移。1953年，勇士队迁至密尔沃基，随后于1966年迁至亚特兰大。1955年，运动家队从费城迁至堪萨斯城，随后于1968年迁至奥克兰。1958年，道奇队和巨人队分别迁往洛杉矶与旧金山。1961年，华盛顿参议员队离开了首都，前往明尼苏达州的双子城，同年被新的华盛顿参议员队取代。新的参议员队在华盛顿度过了十个赛季后，迁至德克萨斯州的达拉斯，成为德克萨斯游骑兵队。1969年，西雅图飞行员队和堪萨斯城皇家队加入美国联盟，而国家联盟则增加了圣地亚哥教士队和蒙特利尔博览会队加入国家联盟。

1977年，第二支加拿大球队多伦多蓝鸟队加入美国联盟。同年，西雅图水手队也加入了美国联盟，但国家联盟拒绝扩张，导致美国联盟有14支球队，而国家联盟仍只有12支。

1993年，美国职棒大联盟再次扩军。科罗拉多落矶队和佛罗里达马林鱼队加入国家联盟。两大联盟再次恢复各有14支球队的格局，每个联盟分为两个区，每个区有7支球队。

1994年，美国职棒大联盟将两大联盟原有的东西部分区改为东、中、西部分区。同年8月，因工资帽问题的争议，美国职棒大联盟球员工会再次发起了罢工，致使该年度的剩余比赛全部取消，世界大赛也因此首次未能举行。

1998年，美国职棒大联盟再次扩军，坦帕湾光芒加入美国大联盟，亚利桑那响尾蛇队加入国家联盟。但随着密尔沃基酿酒人队老板巴德·塞利格决定他的球队应该加入国家联盟后，导致国家联盟有16支球队，而美国职业棒球大联盟有14支。使得各分区队伍数量不一致，球队的比赛日程不平衡，这使得联盟在1997年引入了跨联盟比赛。

2008年3月，洛杉矶道奇队和圣地亚哥教士队在中国北京进行了两场春训热身赛。这也是美国职棒大联盟首次在中国进行比赛。

2013赛季之前，休斯顿太空人队被出售，出售条件之一是他们必须从国家联盟的中部区转移到美国职业棒球大联盟的西区。这使得两个联盟再次达到平衡，各有15支球队，分为3个区，每个区各有5支球队。

2021年12月2日，由于劳资协议期满，美国职棒大联盟遭遇了26年来的首次停摆，这次停摆持续了整整99天，成为了联盟历史上最长的一次。

2023年12月，洛杉矶道奇队以10年7亿美元的合同，签下了原效力于洛杉矶天使队的日本球员大谷翔平。该合同也被认为是体育史上最大的合同。

2024年10月31日，美国职棒大联盟世界大赛第5场比赛。洛杉矶道奇开局0-5落后于纽约洋基，但在第5局一局连追5分。最终，洛杉矶道奇7-6战胜纽约洋基，也以大比分4-1横扫洋基，时隔4年拿下美国职棒大联盟世界大赛冠军，同时收获队史第8冠。

美国职棒大联盟分为两个下属联盟，分别为“美国联盟”和“国家联盟”，两个联盟各有15支球队。各联盟球队按照地理位置和所属联盟，分为美国联盟西区、美国联盟中区、美国联盟东区，和国家联盟西区、国家联盟中区、国家联盟东区6个分区，每个分区5支球队。

每年2月中旬至3月底，美国职棒大联盟会举办赛季前的春训热身赛；常规赛和季后赛通常在每年3月底开始，至10月结束。世界大赛通常在每年10月举办。

美国职棒大联盟每支球队每个赛季要打162场常规赛，常规赛胜率（胜场数量/162）最高的球队就是本区5支球队的第一名，6支赛区冠军球队直接取得季后赛资格。两大联盟胜率前3的非赛区冠军球队获得外卡资格。联盟战绩最好的分区冠军成为季后赛1号种子，联盟战绩第2好的分区冠军成为2号种子，3号种子则是该联盟战绩第3好的分区冠军；4-6号种子按照外卡球队的胜率排名。

联盟1、2号种子直接进入季后赛第2轮分区系列赛，3号种子与6号种子，4号种子与5号种子进行5场3胜制的首轮对决，胜者进入第二轮。其中4号种子与5号种子的胜者对战1号种子，3号种子与6号种子的胜者对战2号种子，进行5场3胜制的分区系列赛，胜者进入联盟冠军赛。联盟冠军赛采用7场4胜制，胜者成为联盟冠军，进入世界大赛。世界大赛同样采取7场4胜制，由美国联盟冠军对阵国家联盟冠军，决出赛季总冠军。

美国职棒大联盟的选秀活动在每年6月举行，选秀前夕，联盟会预先公布一份包含300名球员的候选名单，各球队可自由挑选任何符合选秀条件的球员。若球员不希望被选中，有权在选秀前主动将自己从联盟选秀名单中移除。

美国职棒大联盟规定未满17岁的球员不得参加选秀，且参选者必须持有高中毕业证书。对于在高中毕业前仍未满17岁的球员，他们只有在距离17岁生日不超过45天的情况下，才有资格参与选秀。另外，只有美国公民（含波多黎各等海外领地）及加拿大公民可以参加美国职棒大联盟选秀，其他国家的球员可以与球队直接签约加入联盟。

联盟主席奖杯（Commissioner's Trophy）为美国职棒大联盟主席颁赠的奖杯，资格为每年于美国职棒大联盟世界大赛中获胜的球队。奖杯的设计包含了代表国家联盟与美国联盟每一支球队的旗子。在当年度世界大赛对决的2支球队，会在奖杯底部以大头钉的方式展现。

2022年，美国职棒大联盟年收入超过108亿美元再创新高，在全球体育联盟中仅次于美国国家橄榄球联盟（NFL）。三大转播商FOX、TBS、ESPN在2022-2028年期间生效的转播合同价值总额达到了122.4亿美元。2022赛季，美国职棒大联盟在美国本土地区电视网络的比赛总收视人数就超过4亿人次。

1914年，波士顿红袜队挖来了年仅19岁的投手贝比·鲁斯，在贝比·鲁斯效力球队的4年半时间里，红袜队先后夺得1915、1916、1918年三次总冠军。1920年，波士顿红袜以当时创纪录的10万美元价格将贝比·鲁斯出售至给纽约洋基。此时贝比·鲁斯早已在波士顿成家立业，最终无奈离队的他诅咒波士顿红袜队在他死后的一百年内都拿不到世界大赛冠军。而自1921年开始，波士顿红袜队长达84年无缘MLB世界大赛冠军，直至2004年他们在世界大赛中4-0大胜圣路易斯红雀，方才打破这一“魔咒”。

1994年8月，因工资帽问题的争议，MLB球员工会再次发起了罢工，致使该年度的剩余比赛全部取消，世界大赛也因此首次未能举行。

2021年12月2日，由于劳资协议期满，MLB遭遇了26年来的首次停摆，这次停摆持续了整整99天，成为了MLB史上最长的一次。2022年3月，MLB通过增加广告位置、提升最高薪资限额以及增设季后赛名额的方式做出让步，从而恢复了联赛的正常进行。