胸腺嘧啶 (Thymine) 是一种有机物,化学式为C5H6N2O2,是一种由
胸腺中分离得到的
嘧啶碱。易溶于热水。
紫外线照射可使
DNA分子中同一条链两相邻的胸腺
嘧啶碱基之间形成
二聚体,从而影响DNA的双螺旋结构,阻碍DNA的复制和转录功能。
英文别名: 2,4(1H,3H)-Pyrimidinedione, 5-methyl-;2,4-Dihydroxy-5-methylpyrimidine;2,4-dioxy-5-methyl pyrimidine;5-Methyluracil;Thy;5-methyl-uracil;5-methyl uracil;Thymine 2-4-Dihydroxy-5-methylpyrimidine;5-methylpyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
说明:自胸腺中分离得到的一种
嘧啶碱。
易溶于热水,335~337℃可分解。
紫外线照射可使
DNA分子中同一条链两相邻的胸腺
嘧啶碱基之间形成
二聚体,影响了DNA的双螺旋结构,使其复制和转录功能均受到阻碍。DNA分子中的一条链上的胸腺嘧啶(T)与另一条链的
腺嘌呤(A)相配对,形成2个
氢键,是
DNA双螺旋结构稳定的重要作用力之一。
是合成抗
艾滋病药物
AZT、
DDT及相关药物的关键中间体。上游原料:
冰醋酸、
醋酸丁酯、甲醇、
甲基丙烯酸甲酯、尿素、盐酸、乙醇。也可用化学方法合成。用于药物制造。胸腺嘧啶是
脱氧核糖核酸中的
碱基之一。可与脱氧核糖结合形成胸腺嘧啶的
脱氧核苷,其5-位甲基上的氢为
氟取代后的产物称为三氟代
胸腺嘧啶脱氧核苷,用做抗核酸代谢类
抗肿瘤药物。
胸腺嘧啶核苷为生化试剂,用于制备生物培养基,例如
HAT选择性培养基的制备。HAT选择性培养基使用胸腺嘧啶核苷的原理:在单抗制备中,由于需要进行选择性杀死非目标细胞,所以使用添加HAT的
选择性培养基,其依据是细胞中的DNA合成有两条途径:一条途径是生物合成途径(“D途径”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程,而
HAT培养液中
氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径(“S途径”),它是利用
次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和
胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可。因此,在HAT培养液中,未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基蝶呤阻断,虽“S途径”正常,但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡。对于
骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言,由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型(HGPRT)细胞,因此自身没有“S途径”,且“D途径”又被氨基蝶呤阻断,所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与
效应B细胞相互融合形成的
杂交瘤细胞,既具有效应B细胞的“S途径”,又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性,因此能在HAT培养液中选择性存活下来,并不断增殖。通常HAT中,H(次黄嘌呤)的浓度为1×10-4M,A(氨基蝶呤)为4×10-7M,T(胸腺嘧啶)为1.6×10-5M,在HT培养基中,只需要不加氨基蝶呤,其它都同HAT。HAT培养基的配制:100×A(
氨基喋呤) 贮存液:称取1.76mg氨基喋呤溶于90ml超纯水中,滴加1mol/L的NaOH 0.5ml助溶,待完全溶解后,加1mol/L HCL 0.5ml 中和,再补加超纯水到100ml。0.22um膜过滤除菌,小量分装,-20℃保存。