花药培养是用
植物组织
培养技术,把发育到一定阶段的花药,通过
无菌操作技术,接种在人工
培养基上,以改变花药内花粉粒的发育程序,诱导其分化,并连续进行
有丝分裂,形成
细胞团,进而形成一团无分化的
薄壁组织——
愈伤组织,或分化成
胚状体,随后使愈伤组织分化成完整的植株。
用于
花药或
花粉培养的供体植株,在生长条件下,从幼年的植株取出花药。由于花粉发育时期和花蕾的某些外部形态特征(如花冠筒长度和花冠露出花萼的时间等)之间的大致的相关性,因此可以利用这些外部标志,去选择大致处于所需要时期的花蕾。但在实验中必须由每个花蕾取出一个花药,通过镜检确定花粉发育的准确时期。在水稻中,以
单核靠边期的花粉对诱导
单倍体植株较为适宜,在外部形态上可根据叶枕距为5~15cm,颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2这些条件鉴定。在取穗前先将旗叶鞘用
70%酒精擦洗一遍。在
超净工作台内剥去旗内鞘,取出稻穗,放入10%漂白粉溶液中消毒10min,换无菌水洗一次。在取花药之前用70%酒精将手擦洗两遍。取花药时左手持穗,右手用镊子从颖壳中取出花药,放在无菌培养皿中,待花药有一定数目时,用接种环将他们接种到培养基上。培养5天后,花药逐渐变为黑褐色,20天左右花药裂开,从中长出淡黄色的花粉愈伤组织,以后先形成芽,后长出根,形成幼苗。
烟草花药培养的最适取样期是花粉为单核期的花蕾,此时花蕾的花冠大约与萼片等长。芦笋花药培养的最适取样期也是单核期的花粉,花蕾长2~2.5mm,选取一级侧枝的花蕾较为合适,因为在一级侧枝的花蕾发育良好,数量大,发育同步。烟草花药消毒方法基本与水稻花药培养相同。
必须注意整个操作过程中不应使花药受到损伤,若受到损伤,则应淘汰,因为损伤常常会刺激花粉壁形成
二倍体的
愈伤组织。