补体旁路途径（AP）活化时，C1、C2、C4不参与，而C3、C5～C9及B、D、P、H、I因子参与。用EGTA（
乙二醇双α-氨基乙基醚四乙酸）螯合样品中的Ca2+，可起封闭C1作用而阻断传统补体途径激活。加入可使B因子活化的兔红细胞（RE），激活补体旁路途径，即导致RE溶血。补体活性与溶血程度呈正比关系，也以50%溶血（AP-H50）作为检测终点。
参与补体旁路途径活化的成分为C3、C5～C9、B、P、D因子等，其中任何成分异常都可致AP-H50的改变。①AP-H50增高：见于自身免疫病（如SLE）、风湿热、
结节性动脉周围炎、皮肌炎、
肾病综合征、慢性肾炎、
恶性肿瘤和伤寒等；②AP-H50降低：见于肝硬化、慢性活动性肝炎、
急性肾炎等。