具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡；3%
过氧化氢溶液：临用时配制；挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果；于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性；
革兰氏阳性球菌中，
葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而
链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
方法1：对斜面、平板菌苔(或菌落)或浓菌液慢慢滴上几滴3%H2O2(约0.5～1.0 ml)后，观察在5 min之内有否冒气，凡冒气者为阳性。因血细胞含有过氧化氢酶，故本试验不能在加有鲜血的培养基上进行。在作厌氧菌试验时，在加H2O2前应将培养物暴露于空气中30min。例如，表皮葡萄球菌为阳性，
乳酸乳球菌为阴性。
方法3：此法适用于某些只能在含血红素的培养基上才产过氧化氢酶的乳酸菌。为抑制假过氧化氢酶的形成，应配制特殊的无菌血琼脂基础培养基(在基础琼脂培养基中加入1%葡萄糖和2.5%脱
纤维蛋白血)，然后在100℃下加热15 min，以使血液中过氧化氢酶失活，待冷却至40～45℃后倾注平板。在这种培养基上长出的培养物可用上述1或2法测试。