酶活性测定法是利用酶能专一而高效地催化化学反应的性质，通过测定酶促反应速度来检知体液等生物样品中某种酶的含量和活性的分析技术。

酶活力的测定可采用两种方式：

其一是测定完成一定量反应所需的时间，其二是测定单位时间内的酶催化的化学反应量。

该方式是在特定条件下，将样品中要检知的酶作用一定量的底物，然后根据反应进行到某一程度(即达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶的活力。

其一个发展是采用检测器对反应进行连续跟踪，并在反应达到某一程度时，精确地自动记录所需要的时间，这就是酶分析自动化中的固定浓度法；另一个发展是作成简便的酶检测纸片。

该方式测定原理是：在一定条件下，酶促反应速度和酶浓度成正比，因此测得反应速度就需要求得酶浓度。待测的酶浓度是影响反应速度的唯一因素，其他因素都应处于最适于酶发挥催化作用的水平，为此应选择适宜的底物浓度、缓冲体系、温度，并向反应系统中添加必要的辅助因子。

常用的测定方法有取样法和连续法。

取样法是在酶反应开始后不同的时间，从反应系统中取出一定量的反应液，并用适当方法停止其反应，再根据产物和底物在化学性质上的差别进行分析，求得单位时间内酶促反应的变化量。

连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上的不同，在反应过程中对反应系统添加酶的变性剂以终止反应。常用的连续测定法是光吸收测定法，即根据产物和底物在某一波长或波段上有明显的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法。几乎所有的氧化还原酶都可用此法测定，此外如荧光法、旋光法、电化学法也是常用的连续测定方法。

对不易直接测定的反应，可使用酶偶联分析法，即用过量、专一的“偶联工具酶”，使被测反应继续进行到某一可直接测定的阶段。

近年来，酶活性的测定工作正向两个方向发展，一是超微量酶活的灵敏测定，二是实现测定过程的自动化控制。