饲养层细胞就是指一些特定细胞（如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞），经有丝分裂阻断剂（常用丝裂霉素）处理后所得的细胞单层。一般铺在明胶层上（也可不铺）。饲养层细胞大部分可用MEF（小鼠胚胎成纤维细胞）。

饲养层的影响，主要体现在饲养层种类、丝裂霉素处理饲养层的时间、饲养层细胞的代数和饲养层细胞的密度等。动物种类不同对饲养层种类的要求也不同。

STO PMEF：　对各种动物都较适宜，，但最可靠的方法还是根据动物种类筛选最佳饲养层为宜。有研究表明，PMEF比STO更适合用于小鼠ES（胚胎干细胞）的培养。

UE（子宫上皮细胞）

BRL（大鼠肝细胞）等

动物种类

需要经过筛选来确定最适宜该种动物ES分离克隆的饲养层

丝裂霉素处理滋养层的时间

丝裂霉素（常用有丝分裂阻断剂）处理时间在小鼠成纤维细胞上一般要求为：在37摄氏度，5%二氧化碳饱和温度的条件下处理24h，时间过短达不到预定目的，成纤维细胞不能被成功地抑制住，时间过长则使细胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，从而直接影响ES细胞增殖和分化的抑制。同时处理完的清洗工作也很重要，一般要求用无钙镁PBS冲洗4~5遍，以确保丝裂霉素的彻底清除。

饲养层细胞的代数及密度

以小鼠成纤维细胞为例，选3~5代，密度为10^6-10^7个/ml为宜，代数过低所含杂细胞太多，代数过高则细胞活力降低。