AMPPD为1,2-二氧环乙烷衍生物,它是一种生物化学领域中最新的超灵敏的
碱性磷酸酶底物,其特点:反应速度快,在很短时间内提供正确可靠的结果。
英文名称:3-[2-spiroadamatane]-4-methoxy-4-[3-phosphoryloxy]-phenyl-1,2-dioxetane Dioxetane
在它的分子结构中有两个重要部分,一个是联接
苯环和
金刚烷的二氧四节环,它可以断裂并发射光子;另一个是磷酸根基团,它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下,这种化合物很稳定。但是,如果有碱性磷酸酶存在,DioxetanePhosphate作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团,形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解(二氧四节环断裂),同时发射光子。
AMPPD在碱性条件下,被AP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度达到高峰,15~60min内光强度保持相对稳定。
该试剂采用微粒子
化学发光技术,采用最新
磁性微粒,用以包被抗体。用
碱性磷酸酶(
ALP)标记抗原(抗体)。经过普通
抗原抗体反应,碱性磷酸酶结合在微粒子上,碱性磷酸酶的结合量同病人血清中的待测物质成比例。经过洗涤(反应管两边有磁场,磁性微粒包被的
抗原抗体结合物被吸附在管子两边,其余游离部分被抽吸掉),最后加入发光底物DioxetanePhosphate,5分钟后,仪器通过
光电倍增管检测反应的发光强度。
AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物,在适宜的缓冲液中,随着酶的催化
水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者发出强度很高的光信号,其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时,便可以通过此系统检测到
杂交分子的存在量。