DAPI,即4',6-二脒基-2-苯基吲哚,是一种能够与
DNA强力结合的
荧光染料,常用于荧光
显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的
细胞膜,它可以用于
活细胞和固定细胞的
染色。
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与
DNA强力结合的
荧光染料,常用于荧光
显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的
细胞膜,它可以用于活
细胞和固定细胞的染色。
1971年DAPI在一项关于制抗锥虫病的药物的研究中第一次被合成于OttoDann的实验室。它虽然不是一种成功的药物,但更深入的研究表明它与DNA强力结合并在此时发出更强的荧光,这导致了1975年它被用在超速离心分析法中以标记
线粒体DNA。与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于
荧光显微镜技术中对DNA的染色。上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在
植物,
微生物,多细胞动物和细菌细胞中追踪DNA,1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色,同时也证实DAPI可在
流式细胞术中用作DNA染料。
当DAPI与双股DNA结合时,在
荧光显微镜观察下,DAPI染剂在358nm(
紫外线)处有一个最大吸收峰,并在461nm(
蓝)处有一个最大发射峰,其发射光的波长范围含盖了蓝色至青绿色,因此在荧光显微技术中DAPI被
紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出。DAPI也可以和
RNA结合,但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果,其发射光的波长范围约在400nm左右。
DAPI可用于固定细胞染色,但是因为活细胞染色对DAPI浓度有严格要求,它很少被用于活细胞染色。DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为一种毒性物质与
致癌物。然而在
MSDS中它被标记为无毒。尽管DAPI没有显现出对
E.coli的诱变性,它在机器制造商提供的信息上被认为是一种DNA诱变剂。由于DAPI可以掺入DNA螺旋中,它很有可能有底层的DNA诱变性,因此应小心配置和使用DAPI。