GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(
glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文缩写。GAPDH是
糖酵解反应中的一个酶,广泛分布于各种组织中的细胞。
该酶是
糖酵解反应中的一个酶,由4个30-40kDa的
亚基组成,分子量146kDa。该酶基因为管家(house keeping)基因,几乎在所有组织中都高水平表达,在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,且不受含有的部分
识别位点、佛波脂等的
诱导物质的影响而保持恒定,故被广泛用作抽提total
RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等
实验操作的标准化的内参。常用的内参有,
ACTB(β-actin、β-
肌动蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量误差、加样误差以及各
PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误差、这些都是
管家基因,在各个组织中的表达量相对稳定,其中18S同整个基因谱有关(负责装配),它在总RNA中占的比例最高。
转染了GAPDH相关
siRNA的HeLa细胞在转染后48小时后不断增殖。 红:被标记的siRNA;蓝:被染色的
细胞核;绿色:GAPDH蛋白。
阴性对照(scrambled siRNA)的导入(右)对GAPDH蛋白的表达没有影响,不过若转入一个以GAPDH(左)为靶标的siRNA,则会导致GAPDH蛋白表达水平的急剧下降。
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与
糖酵解的一种
关键酶,由4个30-40kDa的
亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot
蛋白质标准化的内参。因为GAPDH 作为
管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,因此在使用GAPDH内参抗体时,将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后才进行样品与样品之间的比较。