TC染色是TTC和
活细胞线粒体内的
琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲臜,用来表示细胞的活力。配制多为2%,染色要避光,37度条件下,它是评价
脑缺血损伤常用的指标。
1原理:TTC(2,3,5—氯化
三苯基四氮唑)是
脂溶性光敏感复合物,1894年首次合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测
哺乳动物组织的
缺血梗塞。它是
呼吸链中
吡啶—
核苷结构
酶系统的
质子受体,与正常组织中的
脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。
2 取脑:可
麻醉后直接取脑或经
生理盐水灌注后取脑。因为
脑组织未用多
聚甲醛固定,所以较软,取脑时更应仔细,保持大脑的完整性。
4 切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第一刀在脑
前极与
视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在
漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。(参考:
张均田,主编.现代药理试验方法)。如果需计算面积的话,应切得均匀或用专门的脑槽。
6用
锡箔纸盖住后,放入37C温箱15~30min,不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入
多孔板,再滴入TTC,覆以圆形
盖玻片使均匀染色。