sh
RNA是
英文单词short hairpin RNA的缩写。翻译为“短发夹RNA”。shRNA包括两个短
反向重复序列。克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列,中间由一茎环(loop)序列分隔的,组成
发夹结构,由polⅢ
启动子控制。随后再连上5-6个T作为
RNA聚合酶Ⅲ的
转录终止子。
3. Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效地抑制
目的基因。
5. ShRNA目的序列的第一个碱基必须是G以确保RNA聚合酶转录。如果选择的目的序列不以G开头,必须在紧连
正义链的上游加一个G。
6. shRNA插入片段中的茎环应当靠近寡核苷酸的中央。不同大小和
核苷酸序列的茎环都被成功的运用过。其中包含一个独特的
限制性酶切位点的茎环利于检测带有shRNA插入片段的克隆。在比较了众多不同长度和序列的茎环,5'TCAAGAG3'序列最为有效。
8.在正义链和
反义链序列上不能出现连续3个或以上的T。这可能导致shRNA转录的提前终止。