井上 源三郎（いのうえ げんざぶろう）、文政12年3月1日（1829年4月4日） - 庆应4年1月5日（1868年1月29日），新选组六番队组长。讳一武（かずたけ）。
人物生平
文政12年3月1日，作为八王子千人同心・井上藤左卫门的三儿子，出生于多摩郡日野宿。
井上家的祖先为骏河今川家效力，之后成为甲斐・武田家的家臣。
德川幕府时代，以武田家遗臣为中心，组织附近的浪人豪农结成八王子千人同心， 归属
江户幕府的管理。（据说是领幕府俸禄，等级和
武士差不多。）
■弘化4年，源三郎进入
天然理心流剑术第三代宗家・近藤周助的道场、与近藤勇是师兄弟。后他也在土方岁三的姐夫佐藤彦五郎所设的天然理心流道场中练习剑术。
■文久2年2月，与近藤和土方一起加入浪士组上京。
■文久3年9月，在肃清芹泽鸭一派后，成为副长助勤，以后继续担任新选组的干部。
■元治元年6月，池田屋事件时，指挥土方队的支队。
■庆应元年6月，由于组织再度编 成而担任六番队组长。
■庆应3年6月，新选组全员被幕府拔擢为幕臣。
■庆应4年1月、
鸟羽伏见之战爆发。1月5日，新选组在淀千两松与官军激战（淀千两松之战）。在这场战争的中期，井上因为受到枪击而战死。享年40岁。
故事简介
大河剧新选组！内的井上源三郎
沉默寡言,并且具有敦厚
性格,并且据说当来自年轻队士的声望厚了的时候。
有顽固的方面,并且这有了时分据说当当一回开始说的时候甚至杠杆不工作的时候。
井上源三郎，新选组六番组长，作为试卫馆的元老级人物，与近藤、土方、冲田感情深厚，比其他人都年长，近藤勇一直视其为兄长，为人敦厚忠实，颇有长者风范，照顾小辈更是不遗余力，大多数时候都在扮演着好好先生。承担着做菜煮饭、端茶送水，扫洒的工作，并
乐此不疲，享受着其中的乐趣，
低调的作为，常被误认为是仆人[山南就是其中一个，若非亲见其单人制服左手受伤山口一（即后斋藤一）会一直误认]，可以想见他的慈眉善目，温柔性情。
近藤的身边，井上与冲田一老一少，总是随侍在侧，几乎寸步不离，井上一直照顾着俩人的起居，从试卫馆起就是如此。
冲田未得重病前，不改小孩子的心性，对其极为依赖，总是粘在身边，
井上在新选组势力日渐大增后，贵为六番组长，依旧旧习难改，不愿将这些事假他人之手，事事亲力亲为，不放心近藤外出，自己不在身边，近藤只好不厌其烦地一再重申：“您放心，有新的队士保护，您还是好好休息。真的没关系的，您别担心。”
冲田天赋异禀，曲高和者必寡，池田屋一役更是声名大振，（杀戮渐多，身心不堪重负，心下感慨良多，亦有其始知绝症在身，不久于人世的原因在，个性变得深沉难测，对人性思考过后有了自己的见解，成熟稳重了许多，大多数时节缄口沉默。）未免让人产生距离感，嫌其孤高太过，目下无尘，有些冰，令人肃然起敬极为神往而不敢深交。
井上平庸朴实，也许在天才面前，谁都显得暗淡，只是多得了一份可以跨越一切障碍的亲切，就足以让他不平凡了。
如果冲田是冬雪纯净无瑕，内心清澈，那么井上就是春阳温暖和煦，内心炽热。
井上与斋藤一样，并不喜多言，行事不多张扬，斋藤就像藏于背后的出鞘剑，杀气逼人，显得阴暗，井上则不然，他就像久未开锋的匣中剑，总是聚敛气息，显得平和。
不同于斋藤羡慕他人的热闹，又害怕光热灼伤的远离，井上纯粹是喜欢看到欢乐的喧闹，大家尽情嬉闹就是井上最大的满足。
像孩子般笑着的冲田会突发奇想地提出些怪异的问题，引发大家热烈的讨论，他并没有插嘴，只是静静地聆听，低头才发现冲田正拉着自己的衣角撒娇，面对一脸乞求，向自己征求答案的冲田，井上总是这样笑得温煦而满足，让人忘记他是身为剑士而存在的事实，忘了他亦深具威胁性。
如果没有动荡的时局，没有战争，没有新选组，井上会一直在那个穷道场里，每天鸡鸣前，起床，提水、煮饭、擦地……，鸡鸣后，与美津（冲田的姐姐）一起把赖床的近藤、冲田、土方叫起来，一天很简单地开始，很简单地结束，这样的日子平板而又单调，周而复始，但已经很幸福，他是知足的人，拥有这就够了。
那夜大雪，万籁俱寂，只听得“啪啪”的声响，天亮时分大雪方霁，积雪还很厚，才发现不堪大雪重负的树枝全断了，要变天了，是注定，是天意。
井上极其疼爱近藤周平（近藤勇的养子，后因脱逃而与近藤脱离这层关系，改回本姓，但仍保有“周平”这个名字），对他给予最多的爱护。
为其意志不坚脱逃下跪求情，总是温言安慰，让周平振作，引荐冲田作周平的剑术老师。
伏见战役，因局长近藤鸟羽被暗算中枪伤重，退居京都与重病的冲田一起，副长土方暂代其职，领导新选组冲锋陷阵。
此一役惨烈无比，新选组孤军深入，拼死血战，井上为救胆怯不前而被困于战壕的近藤周平跃出阵地，引开敌人而被乱枪扫射，多处要害被击中，众人抢回奄奄一息的他，他望着周平：“你要记住，你是近藤家的孩子，要勇敢，要活下去。”之后就此闭上了眼睛。
众人嚎哭恸天，斋藤像疯了一样，一人率先冲进敌阵，连杀数十人，锐不可当，他要复仇！为他们最可敬可爱的源三郎复仇！众队士紧随其后，也杀将过去。
每个人心头被愤懑、悲伤压得喘不过气来，唯有复仇方得以平息缠绕在心里的这种痛苦。
冲吧！冲吧！天也被血色染红了。
深夜，近藤还未睡，这将又是一个不眠夜。
突然，他看见了井上走进来，含着热泪：“我回来了。”
近藤诧异问：“他人呢？为什么只有你一个？”
井上回答：“是我太心急，想早点回来，就提前了些。”
近藤突然领悟，眼前的井上不过是幻像，一个魂魄，是留恋让他显灵来道别，今后便是阴阳相隔，再不得见了，不禁流下了眼泪；“鬼是不能哭的。”
井上笑了，眼底还有泪光，那影像渐渐淡了，被清晨的霞光包围，就此融进光里消失不见了。
上天又收回了一个灵魂。