农杆菌介导法主要以植物的
分生组织和
生殖器官作为
外源基因导入的受体,通过真空渗透法、浸蘸法及
注射法等方法使农杆菌与受体材料接触,以完成可遗传细胞的转化,然后利用
组织培养的方法培育出转基因
植株,并通过抗生素筛选和分子检测鉴定转基因植株后代。
转基因技术的飞速发展为生物定向改良和
分子育种提供了一种较佳的方法,并使其成为
基因工程和育种的最有效途径,应用较广泛的转基因技术有
农杆菌介导法、
花粉通道法、
显微注射法、
基因枪法、
离子束介导法等等,其中农杆菌介导法以其费用低、
拷贝数低、
重复性好、
基因沉默现象少、转育周期短及能转化较大片段等独特优点而备受科学工作者的青睐。农杆菌介导法主要以植物的
分生组织和
生殖器官作为
外源基因导入的受体,通过真空渗透法、浸蘸法及
注射法等方法使农杆菌与受体材料接触,以完成可遗传细胞的转化,然后利用
组织培养的方法培育出转基因
植株,并通过抗生素筛选和分子检测鉴定转基因植株后代。
根癌农杆菌的Ti质粒上有一段
转移DNA(T-DNA),具有向
植物细胞传递外源基因的能力,而细菌本身并不进入
受体细胞。农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应,主要包括:①受伤的植物细胞为修复创伤部位,释放一些糖类、
酚类等
信号分子。
②在信号分子的诱导下,农杆菌向受伤组织集中,并吸附在
细胞表面。
④转移DNA进入
植物细胞,并整合到植物细胞
基因组中。因为
单子叶植物不是农杆菌的天然寄主,况且其不能合成起
诱导作用的信号分子,所以限制了农杆菌介导法在单子叶植物中的应用。不过近年来大量成功转化的实例表明,植物、真菌、
哺乳动物甚至人类细胞都可以作为农杆菌的受体