蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸,在碱性条件下,可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色(生成钼蓝和钨蓝化合物)。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比, 可用比色法测定。
于2000ml磨口回流装置内加入
钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,
钼酸钠(NaMoO4·2H2O)25g。水700ml,85%的磷酸50ml,
浓盐酸100ml,文火回流10h,加入
硫酸锂(Li2SO4)150g,蒸馏水50ml,混匀取去冷凝器,加入几滴液体溴,再蒸沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色。若溶液有绿色,需再
加数滴
液溴,再蒸沸除去,冷却后定容至1000ml,过滤,滤液置于棕色瓶中。
将1ml标准蛋白溶液和5ml0.025mol/lPH7.5的
磷酸缓冲液加入试管中,在40℃保温10min,迅速加入1ml酶液,保温15min后加入3ml10%的
三氯乙酸中止反应。取滤液1ml加入0.55M的碳酸钠溶液5ml和福林试剂0.5ml,40℃水浴10min显色,在OD680处比色。