组织培养繁殖是在人工
培养基中,使离体
组织细胞培养成为完整植株的繁殖方法。果树的组织培养材料是植株离体材料,称外植体。
果树组织培养繁殖的研究,始于20世纪40年代。中国起步较晚,但发展较快。已在
苹果、
葡萄、
柑橘、
草莓、
猕猴桃、菠萝、
枇杷等树种上开展了组培脱毒和苗木繁殖工作,建立了苹果、葡萄、草莓、猕猴桃等果树的组培苗木果园。
培养基是外植体赖以
生长和
发育的
基质。常用的培养基有含盐种类较少,盐量较低的White、Nitsch、Knop培养基;也有含盐种类较多,盐量较高的B5、B6、H Ls及M等培养基。MS培养基的主要成分包括N、P、K、Ca、Mg等
大量元素和
Mn、
Zn、Cu、
Co、B、I、
Mo、Fe等
微量元素、
蔗糖及氨基酸、
B族维生素、
烟酸、肌醇等有机成分。培养基中加用6-8%的
琼脂做凝固剂。还须加入一些附加成分,如水解酪蛋白、
植物激素。常用的植物
激素有
细胞分裂素,如激动素(KT)、六苄基
腺嘌呤(BA)、
玉米素(Zi)等;以及生长素,如
吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)及2,4-
二氯苯氧乙酸(2,4-D)等;
常用的接种材料有茎尖、茎段、叶片等,一年四季都可取摘、接种,各季节的材料都能分化、出苗。材料的大小,因培养目的而不同,为脱除繁殖材料的病毒,就
原子能0.1-0.2mm的茎尖;对一般繁殖材料,可取大茎尖或茎段培养,以提高分化率和分化速度。一般要经过以下两个
灭菌过程,先用湿润剂处理使
杀菌剂能很好渗入培养材料,湿润剂有70-
75%酒精等,酒精兼有杀菌能力;再选择灭菌快而彻底,容易从材料上去除,并对接种材料毒害
作用小的药剂。
生根培养:采用1/2Ms、1/2B5、White、Knop等含盐量低的培养基。将培养基所用的盐类和生长素配成营养液,把够标准的绿苗基部浸于营养液中培
养生根。生根培养的温度与扩大繁殖期间基本相同。而光照强度一般要求在2000勒克斯(lx)以上。