胶体金检测,
医学术语,胶体金是一种常用的
标记技术,是以胶体金作为示踪标志物应用于
抗原抗体的一种新型的免疫标记技术,有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的
免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、
分子生物学以至
生物芯片中都可能利用到。
胶体金是由
氯金酸(
HAuCl4)在
还原剂如
白磷、
抗坏血酸、
枸橼酸钠、
鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于
静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带
负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在
弱碱环境下带
负电荷,可与
蛋白质分子的
正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它
生物大分子结合,如SPA、
PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、
颗粒大小、形状及
颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金广泛地应用于
免疫学、
组织学、
病理学和
细胞生物学等领域。
胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因
静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与
葡萄球菌A蛋白、
免疫球蛋白、毒素、
糖蛋白、酶、
抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非
共价结合,因而在
基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫
金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速
免疫检测方法中,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。
细胞悬液
涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,以银
显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的
敏感性。
可用胶体金标记的抗体或
抗抗体与负染病毒样本或组织
超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。
应用
微孔滤膜(如膜)作载体,先将
抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的
抗体检测相应的抗原或抗体。
将
特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或
单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过
毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,再移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的
结合物又与之发生
特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。
是将特异的抗体先固定于酸类纤维素膜的某一区带,当该干燥的酸类纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于
毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合。同时利用金粒具有高
电子密度的特性,在金标
蛋白结合处。当这些
标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色的斑点。既为快速的金标检测方法原理。生产快速而精确试剂,要点在于所采用的单克隆抗体、多元克隆抗体、抗原、
半抗原、蛋白嵌合物及胶体金等原料的
灵敏性及特异性等是否能达到最高的标准,此为金标试剂的质量之最重要的标准。