葡萄牙的伊莎贝尔公主（葡萄牙语：Isabel；德语：Isabella；1503年10月24日-1539年5月1日）神圣罗马帝国皇帝查理五世的妻子，神圣罗马帝国皇后，西班牙、德意志、意大利、那不勒斯和西西里王后以及勃艮第公爵夫人。曾于1529年至1532年、1535年至1536年和1538年至1539年期间担任西班牙摄政王。伊莎贝尔是天主教双王伊莎贝尔一世和费尔南多二世的外孙女。由于伊莎贝尔的性格和政治上的决心，在她的一生中，许多人都将她与她的外祖母相比较。伊莎贝尔是个貌美如花且聪慧的女子，查理五世常年旅居欧洲各地，由于国外政事，他很少待在西班牙。因此，对于查理而言，伊莎贝尔无疑是西班牙的灵魂，得益于伊莎贝尔的统治，西班牙才能够在帝国政策中保持独立。

伊莎贝尔是葡萄牙国王曼努埃尔一世和其第二任妻子阿拉贡的玛丽亚的长女。她的名字是以其外祖母卡斯蒂利亚女王伊莎贝尔一世和其父的第一任妻子兼其姨母阿拉贡的伊莎贝尔的名字命名的。由于伊莎贝尔的大哥米格尔早夭，因此，直到她的弟弟路易斯于1506年出生之前，伊莎贝尔一直是仅次于二哥若昂（后来的葡萄牙国王若昂三世）的葡萄牙王位的第二顺位继承人。

作为葡萄牙国王的长女，伊莎贝尔是一个相当诱人的结婚人选。伊莎贝尔在父母和兄弟姐妹的陪伴下度过了一个快乐的童年。她在家庭教师埃尔韦拉·德·门多萨的监督下接受了教育，逐渐成为一个美丽聪慧的年轻女子。她学习了拉丁语、西班牙语和法语，以及基督教教义和文艺复兴时期的经典著作。除此之外，伊莎贝尔非常富有，她拥有一个巨大且齐全的藏书室，其中包括用来祈祷和充实自身的神学作品；还有一些公主所爱的更加世俗的作品，特别是骑兵方面的作品。

1517年，伊莎贝尔的母亲玛丽亚离世。她在遗嘱中明确告诉丈夫曼努埃尔，希望伊莎贝尔只嫁给国王或国王的婚生子。玛丽亚的外甥，伊莎贝尔的表哥，卡斯蒂利亚女王胡安娜和国王腓力一世的儿子查理被认为是她的理想配偶。查理和伊莎贝尔的联姻会使西班牙王国和葡萄牙王国结成强大的联盟，这也禀承了双方祖辈卡斯蒂利亚女王伊莎贝尔一世和阿拉贡国王费尔南多二世的意愿。为了在不与卡斯蒂利亚发生冲突的情况下继续探索海洋，葡萄牙与西班牙之间的联盟必不可少。很明显，卡斯蒂利亚也需要葡萄牙作为盟友。在欧洲不断发展的过程中，由于查理拥有多个王国的主权，特别是在他被选为神圣罗马皇帝后，卡斯蒂利亚需要盟友。在卡斯蒂利亚王位继承战争结束后，葡萄牙必须被纳入卡斯蒂利亚的势力范围内，而不是法国。如果葡萄牙成为卡斯蒂利亚的盟友，则意味着他们在伊比利亚半岛和海外都有后盾，因为葡萄牙是唯一一个能够挑战卡斯蒂利亚在大西洋霸权地位的海军强国。此外，葡萄牙也是基督教世界中最富裕的国家。葡萄牙同意且允许卡斯蒂利亚巩固其在梅利利亚和卡扎扎的地位，而且葡萄牙的支持也对打击北非伊斯兰教地区的异教徒十分必要。综上所述，与葡萄牙结盟是和平与稳定的保证。

然而，查理的佛兰德顾问，尤其是威廉·德·克罗伊，说服查理将葡萄牙作为备选，优先考虑与英格兰联盟。1521年，查理与他的另一个表妹玛丽·都铎（后来的英格兰女王玛丽一世）订婚，她是英国国王亨利八世和阿拉贡的凯瑟琳的女儿，比查理小16岁，还是个孩子。查理和玛丽之间的联姻试图破坏由雄心勃勃的红衣主教托马斯·沃尔西阐明的英法联盟。当查理拒绝了伊莎贝尔后，许多葡萄牙人都觉得遭到了冒犯，但伊莎贝尔仍然下定决心，希望嫁给查理。她只选择和查理结婚，否则就进修道院。到了1525年，查理对与英格兰结盟失去了兴趣，他也不能再等到玛丽·都铎长大，因为他决心要有合法的孩子。他取消了与玛丽·都铎的婚约，抛弃了与英格兰的联盟，最终寻求与伊莎贝尔结婚。他和伊莎贝尔结婚有更多好处——她的年纪与查理相仿（比他小三岁），精通西班牙语，葡萄牙还为她提供了90万葡萄牙十字银元的巨额嫁妆，这足以解决1521年至1526年期间的意大利战争为查理带来的许多经济和财务问题。与葡萄牙结盟的谈判和婚姻合同已经达成——伊莎贝尔将会嫁给查理而她的哥哥若昂将与迎娶查理的妹妹卡塔琳娜。

1526年1月，伊莎贝尔启程前往西班牙。抵达后，她在西葡边境受到了卡拉布里亚公爵、托莱多大主教和贝雅尔公爵的迎接，在他们的护送下，伊莎贝尔前往塞维利亚等候皇帝。伊莎贝尔于三月初到达塞维利亚，一周后，查理也到了。虽然他们的结合最初纯粹是政治安排，但查理深爱着美丽的伊莎贝尔，3月11日，两人在塞维利亚王宫举行了婚礼。尽管皇帝不在西班牙，但夫妇二人婚姻幸福，双方都对彼此忠贞不二。婚后，这对新人在格拉纳达的阿尔罕布拉宫度过了一个漫长且快乐的蜜月。“当（查理和伊莎贝尔）在一起时，虽然他们身边围绕着许多人，但他们没有留意其他任何人；他们谈笑风生，没有什么能分散他们的注意力。”

在1529年至1532年和1535年至1539年期间，伊莎贝尔在丈夫外出期间担任西班牙摄政王，她被证明是一位非常出色的政治家。伊莎贝尔所受的教育不仅仅是要将她培养成一位母亲和妻子，在父母的培养下，她继承了其外祖母的血统，成为了一名意志坚强的女性。当时所有的文献资料都表明，伊莎贝尔对伊比利亚半岛上国与国之间的问题有着深刻的见解，她毫不妥协地捍卫王权和君主的最高权威。对外，她的明智之举对保卫伊比利亚半岛和北非海岸免遭海上劫掠起了决定性作用。

在其摄政期间，伊莎贝尔在西班牙各处游历。由于托莱多和塞维利亚的气候非常炎热，再加上她患过几次疟疾，因此，她在天气和煦的阿维拉度过了夏天。秋季，她经常在托莱多、巴利亚多利德、塞维利亚、巴塞罗那和马略卡岛之间旅行。为了缓解夫妻之间的思念之情和处理帝国的重要事务，查理和伊莎贝尔定期给对方写信。有时候，皇帝几个月没有写信，到了令皇后担心的地步，伊莎贝尔便在一封信中“骂”了他，说她至少会“每二十天写一次（信）”。当她听说丈夫要回来时，她会为了接待他而举办一场盛大的宴会，但在她独自一人与孩子、侍女和顾问生活期间，她则过着非常简单的生活。伊莎贝尔也是一位优秀认真的母亲，她抚养和照顾子女，确保让他们接受教育，特别是他的儿子西班牙国王费利佩二世，在她的培养下，费利佩获得了丰富的知识和非凡的智慧，她甚至还教孩子们葡萄语。

伊莎贝尔晚年长期发烧，她曾多次患上疟疾，这使她的身体非常虚弱。她一共怀孕七次，其中五次分娩成功，但有两个孩子早夭。她还曾流产两次。丈夫的缺席给伊莎贝尔带来了巨大的孤独感，一些历史学家认为这使伊莎贝尔本就虚弱的身体状态雪上加霜。1539年，伊莎贝尔第七次怀孕，但在怀孕的第三个月，她又发了一次高烧，并引起了产前并发症，导致皇后生下了一个死胎。两周后，她于1539年5月1日去世，年仅36岁。

查理五世对妻子的死感到很震惊，他命令他们的儿子费利佩陪着母亲的遗体，自己则关在修道院两个月，在那里他独自为妻子祈祷和哀悼。圣·弗兰西斯·波吉亚护送伊莎贝尔的遗体去往格兰纳达的葬地。据说他那时目睹死亡的阴影降临到美丽的皇后身上，他就决意“永不再服务于一名凡世的主人”。查理再没有从伊莎贝尔的死中恢复过来，他再也没有结婚，余生都穿着黑色的衣服。

伊莎贝尔与查理五世育有七名子女：