免疫沉淀法
研究蛋白质间交互作用的生物技术
免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)是一种研究蛋白质交互作用的生物技术,这种技术是将蛋白质视为抗原,并利用抗体与之进行特异性结合的特性,来进行研究。这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中,分离和浓缩出特定蛋白质。进行免疫沉淀法时,抗体需要和一个受质结合。
类型
个别免疫沉淀法(IP):用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质
染色质免疫沉淀法(ChIP):用来研究DNA上的特定蛋白质
RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)。RIP技术下游结合microarray技术被称为RIP-Chip,帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。
Millipore基于磁珠的RIP实验流程
基本原理
RIP 实验基本原理:
2. 防止非特异性RNA的结合。
3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。
4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
参考资料
最新修订时间:2023-06-02 20:51
目录
概述
类型
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