大量研究表明:在性关系混乱的人群中,加德纳菌性
阴道炎有高流行率。与患者发生性关系的男性伴侣中,90%的
尿道中可发现此菌。
加德纳杆菌为革兰氏阴性细小杆菌,常呈球杆状,有时呈丝状和多形状,常见两极染色。宽0.4--0.6微米,长1--2微米大小,无活动力、无
鞭毛、无
芽孢。许多菌株有
荚膜。在人工培养时必须给予新鲜血液才能生长繁殖,故有“嗜血”之称。但其生物特性与嗜血杆菌不尽相同,临床上引起的阴道炎为
非特异性阴道炎。
营养要求较高,在普通琼脂平板上不生长。多数为兼性厌氧,接种在含5%人血琼脂平板上,3%~5%二氧化碳,35~37℃培养24h,形成针尖大小菌落;48h后菌落直径0.4~0.5mm,呈圆形,不透明,光滑。在人血和兔血琼脂培养基上形成β-溶血环。甲哨唑(50μg/片)抑菌试验阳性。
阴道加德纳菌触酶阴性,大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖产酸,不发酵甘露醇、棉籽糖和肌醇,赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸脱羧酶阴性,V-P、靛基质、明胶液化、
硝酸盐还原和硫化氢均阴性。水解马尿酸钠。
加德纳杆菌引起的感染多数较轻,多见于性活跃妇女。急性期
白带增多,有鱼腥或氨的臭味,
外阴潮湿不适,常伴有阴道灼热感、性交痛及外阴骚痒。检查见部分患者外阴红肿,
阴道粘膜充血,呈灰红色,轻度红肿,分泌物多呈均质性,稀薄,灰白色,有时为乳黄色或类绿色,腥臭味。阴道pH常为5--5.5。有时
白带量少,仅有薄薄一层,如膜样覆盖在充血的阴道壁上。少数患者阴道壁有红斑或淤点,孕妇患者可引起流产或产后
子宫内膜炎。感染重者也可导致
败血症、
尿道感染、
肾周脓肿和
膀胱炎等。
1、临床标本:宫颈分泌物,取自医院门诊妇产科就诊的
非特异性阴道炎(NSV)患者,
常规消毒用无菌棉签自宫颈口取分泌物于无菌
生理盐水管中。
3、
吖啶橙染色荧光法:取无菌生理盐水中的宫颈或阴道分泌物直接涂片,
自然干燥,火焰固定,0.1 mmol/L吖啶橙染色37℃30 min,用0.01 mol/L PBS冲洗2次,0.01 mmol/L
氯化钙分色1 min,用0.01 mol/L
PBS缓冲液冲洗1次,甘油封片,
荧光显微镜观察结果。在
上皮细胞中发现成堆桔黄色细小
杆菌为阳性。
4、
分离培养鉴定法:将
无菌生理盐水中的阴道或宫颈分泌物,以无菌手续接种于阴道加德纳菌专用
分离培养基上,置5%
二氧化碳培养箱37℃
孵育48 h,
挑取灰色、半透明、光滑、露滴状样
菌落,如为
革兰染色阴性小杆菌者,进行生化鉴定,生化鉴定标准按文献进行鉴定。
5、PCR检测法:(1)根据Belkum等报道加德纳菌位于IIS-23srRNA基因区为特异性
引物序列,扩增片段:433bp。引物15′-TTTCGTGGAGGGTTCGATTCTGG-3′引物2 5′-TACA-AGCTGATAGGACGCG-3′由上海生物工程公司合成。(2)临床标本模板DNA的制备:将宫颈分泌物500μl
生理盐水中,12 000 r/min离心10 min,弃
上清液,加碱性裂解液,98℃10 min,12 000 r/min离心5 min,取上清液做模板。(3)
PCR扩增和产物检测:反应总体积为25μl,包括10×PCR缓冲液2.5 μl,4×dNTP 1.5 μl,引物1,2各0.25 μl,无菌
去离子水9.5μl,模板10 μl,Taq
DNA聚合酶1 U/μl,以无菌
石蜡油30 μl覆盖,进入PCR循环,循环参数为:95℃5 min,94℃ 1 min,58℃ 1 min,72℃ 1 min,32个循环,最后72℃延伸5 min。取扩增产物15 μl,于2%
琼脂糖(含EB液)上100 V电泳30 min,于紫外光下观察结果,出现433 bp扩增带者为阳性,未见433 bp扩增带为阴性。
异染性染料,
吖啶橙以插入方式与病原体双螺旋
DNA分子结合,根据病原体DNA或
RNA对吖啶橙染料的吸附方式不同所放射的荧光也不同,再加上加德纳菌在侵袭的靶目标为
上皮细胞聚集,当吖啶橙染色后在荧光照射下,发射出桔红色荧光,能清晰地检测出加德纳菌在上皮细胞上的聚集现象,作出精确的诊断。
3、
分离培养鉴定法是国际确认的金指标,临床上由于不正规的应用抗生素,导致许多病原体在一定程度上受到抑制,给分离培养带来困难,造成分离培养
阴性结果,建议做分离培养应取材于治疗前的标本,需要专用的高营养的培养基,以提高分离培养的阳性检出率。
4、PCR技术具有高度的特异性和敏感性,选用特异的
寡核苷酸引物序列,检测目的是病原体的遗传物质DNA不受抗生素治疗等药物治疗的影响,对彻底根治病原体有着极其重要的意义。
将
四环素100毫克和
磺胺噻唑0.5克制成栓剂,置入阴道深部,每晚一次,共10日。