荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)是一种定量免疫分析技术,其基本原理是
荧光物质经单一平面的蓝
偏振光(485nm)照射后,吸收光能跃入
激发态,随后回复至
基态,并发出单一平面的偏振荧光(525nm)。
偏振
荧光的强弱程度与
荧光分子的大小呈正相关,与其受激发时转动的速度呈反相关。FPIA最适宜检测小至中等分子物质,常用于药物、激素的测定。
荧光偏振免疫分析常用于测定
半抗原的药物浓度。反应系统内除待测抗原外,同时加入一定量用
荧光素标记的小分子抗原,使二者与有限量的特异性大分子抗体竞争结合。当待测抗原浓度高时,经过竞争反应,大部分抗体被其结合,而荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态。由于其分子小,在液相中转动速度较快,测量到的
荧光偏振程度也较低。反之,如果待测抗原浓度低时,大部分荧光素标记抗原与抗体结合,形成大分子的
抗原抗体复合物,此时检测到的荧光偏振程度也较高。荧光偏振程度与待测抗原浓度呈反比关系。我们测定待测抗原
标准品后制
标准曲线。通过检测反应系中
偏振光的大小,从标准曲线上就可以精确地得知样品中待测抗原的相应含量。