超薄切片技术是
透射电镜样品制备方法中最基本的一种。由于电子束穿透能力的限制,透射电镜观察的样品必须很薄。普通光镜切片厚度通常不低于5um,而透射电镜所需要超薄切片的厚度则要求小于100nm。超薄切片制备技术包括:取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色。
超薄切片系供
电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片。为了观察生物体的微细结构,
电子显微镜所用的超薄切片, 需要经过了解
取材的基本要求,取材和制备超薄切片的过程, 即为
透射电镜标本(超薄切片)的制备。
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞
自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:
(1)动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%
戊二醛固定液。
为
固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定。
(4)操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞
自溶。
将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的
固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较多的血液和
组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定。
超薄切片技术是一种常见的
透射电镜制样技术,在材料科学领域有着非常广泛的应用,尤其适合
有机高分子材料和无机粉体材料,可以非常简单方便的获得纳米级切片,供透射电镜观察;对金属材料和其它
无机材料也有一定的应用。另外,因为这一技术也可以非常方便的获得样品的截面信息,因此在
扫描电镜和
原子力显微镜制样方面也有一定的应用。