乌苏里瓦韦(Lepisorus ussuriensis (Regel & Maack) Ching)是
水龙骨科、瓦韦属附生
蕨类植物。植株高可达15厘米。根状茎细长横走,鳞片披针形,褐色,基部扩展近圆形,胞壁加厚,网眼大而透明,近等直径,网眼长方形,边缘有细齿。叶着生变化较大,叶柄禾秆色,或淡棕色至褐色,光滑无毛;
叶片线状披针形,向两端渐变狭,短渐尖头,或圆钝头,主脉上下均隆起,小脉不显。孢子囊群圆形,位于主脉和叶边之间。
附生蕨类。植株高10-15厘米。
根状茎细长横走,密被鳞片;鳞片披针形,褐色,基部扩展近圆形,胞壁加厚,网眼大而透明,近等直径,向上突然狭缩,具有长的芒状尖,网眼长方形,边缘有细齿。叶着生变化较大,相距3-22毫米;
叶柄长1.5-5厘米,禾秆色,或淡棕色至褐色,光滑无毛;叶片线状披针形,长4-13厘米,中部宽0.5-1厘米,向两端渐变狭,短渐尖头,或圆钝头,基部楔形,下延,干后上面淡绿色,下面淡黄绿色,或两面均为淡棕色,边缘略反卷,纸质或近革质。主脉上下均隆起,小脉不显。
孢子囊群圆形,位于主脉和叶边之间,彼此相距约等于1-1.5个
孢子囊群体积,幼时被星芒状褐色隔丝覆盖。
分布于中国
安徽(黄山九华山)、
河南(伏牛山太行山)、山东(崂山、泰山、柳埠、烟台)、河北(兴隆雾灵山)、北京(海淀、金山、门头沟、怀柔、密云)、
辽宁(本溪、鞍山、大连、丹东、凤凰山、岫岩、金州)、吉林(小兴安岭、敦化、安东、长白山)、
黑龙江(饶河、带岭)。
获得外植体:取带有孢子囊颜色为黄绿色(近成熟孢子囊颜色呈黄绿色,成熟孢子囊颜色呈深黄色或棕黄色,近成熟孢子囊的分化能力相比成熟孢子囊更强,有利于后续乌苏里瓦韦的萌发及生根。)的乌苏里瓦韦叶片,在阴凉通风处干燥后保存备用,全过程保持孢子囊完整。
外植体消毒:取带有完整乌苏里瓦韦孢子囊的孢子叶片,无菌水浸泡20-30小时,75%的
乙醇消毒20-40秒,无菌水冲洗3-5次,之后用体积分数为0.1%的
氯化汞溶液消毒8分种,无菌水冲洗3-5次后备用,消毒过程中不打破孢子囊。
诱导萌发:在
超净工作台内,消毒后的外植体,取其孢子接种于诱导萌发培养基中培养,得到萌发的乌苏里瓦韦叶片;在组织培养过程中,外植体消毒是十分重要的步骤,传统消毒方式是将孢子直接放入消毒剂中,若消毒时间短,则消毒不完全,后续培养染菌,但若消毒时间过长会影响后续孢子萌发率。将带有孢子囊的叶片放入消毒剂中消毒,之后打破孢子囊收集孢子进行接种,可以达到良好的消毒效果,避免培养过程中染菌,同时保证了较高的孢子萌发率。诱导萌发培养基为:以1/2MS为
基本培养基,附加0.3-0.7毫克/升6-BA,0.01-0.03毫克/升NAA,20-50克/升蔗糖,5-10克/升琼脂,pH值为5.8-6.0。培养条件为:湿度40-60%,温度25±2℃,光照10-15小时/天,培养周期为30-50天。
诱导生根:在
超净工作台内,将诱导萌发得到的萌发的乌苏里瓦韦叶片移种在诱导生根培养基中培养,得到完整再生植株。诱导生根培养基为:以1/2MS为
基本培养基,附加0.4毫克/升NAA,1.5克/升活性炭,20-50克/升蔗糖,5-10克/升琼脂,pH值为5.8-6.0。培养条件为:湿度40-60%,温度25±2℃,光照10-15小时/天,培养周期为20-40天。