荧光检测是一种自然发光反应,通过
荧光素酶与
ATP进行反应,可检测
人体细胞、细菌、
霉菌、食物残渣,在15秒钟内得到反应结果。
光照度通过
专用设备进行测量,并以数字形式予以表示,在1975年首先被应用到
食品工业中,在1985年在化妆品制造业中得到应用。
荧光检测的主要缺点在于只有少数化合物产生荧光。大多数的分子不发荧光,但含有可衍生的
官能团用于合成能发荧光的衍生物,例如,
邻苯二甲醛是一种常用荧光基团用于柱后衍生
氨基酸。虽然荧光检测很灵敏,但对于常见的样品分析来说不需要如此高的灵敏度。因为ELSD的响应不依赖于荧光基团,所以不需要衍生,因此大大降低了
样品预处理和分析时间。
封闭操作:全部检测过程均为闭管操作,于反应管处检测荧光,有效防止污染,解决
PCR技术中最棘手之难题。
准确定量:满足临床对量化的需求,定量范围宽,可涵盖大部分
病原微生物,自动
曲线拟合。
升级版:FS1000有与电脑连接的数传输口,可以连接电脑,根据用户需要提供先进分析软件,
全面分析实验数据。(电脑和打印机选配件)
优点是速度快,非常适合做大数量统计,且样品只被检测一次,完全不用担心
荧光淬灭的问题。缺点是只能检测荧光的有无、强度大小,无法提供
空间定位信息,无法做荧光定位变化的实验;由于样品只被检测一次,因此无法对同一个样品进行连续观察。例如,做
膜蛋白定位时会得到这么一个结果——用流式可以检测出信号,但是用显微镜却看不到东西,排除仪器和
滤光片选择问题,很可能是核的
自发荧光或非特异标记造成流式的
假阳性结果。
刚好与流式互补,可很好地进行
空间观察,判断目标蛋白的定位,但是不适合做大流量检测,估计没人能经得起时间的考验。有不同倍率的
物镜选择,可以使用
高倍物镜看
精细结构,或用小倍率物镜做少量统计。与之搭配的
CCD和软件,是系统能否发挥性能的关键。尤其是CCD,从那么多商品里选一款合适的不容易,需要了解很多知识否则只能听别人忽悠。
荧光显微镜的升级产品,具有很好的光学层切效果,能得到很好三维定位信息。但是,如果使用
共聚焦的目的仅仅是为你的样品拍一张靓照,取得一张好看的图片,就让人觉得可惜了。共聚焦基本都是全
自动系统,可随意定义照明区域、选择多个荧光通路和设定定时取图,所以,做Time-laps、
FRAP和
FRET有其独到的优势。另外,4Pi和STED又是其中的极品,具有超高的
空间分辨率,只是使用不方便,未必适合做
生物实验。
荧光显微镜的另一种升级产品,属于
近场光学范畴,只适合且最适合做膜研究,无法看到胞内信息。也是用
CCD成像,但是对CCD的要求更高——个人甚至觉得对CCD的要求是没有上限的。
另一种
共聚焦,因使用
长波激发荧光,故能做深层检测(突破共聚焦的100微米极限),最典型的应用是观察活体
脑组织。
巨贵无比,国内没有几台,能用上的人不多——就不说了。
流式和显微镜的
杂合体,使用电动
载物台,可以自动地按预定程序完成实验,可做大流量检测(虽然速度慢点),而且有成像能力,可以判断定位。