(1)
比色法:ALP在碱性条件下使
磷酸苯二钠水解,生成磷酸和
游离酚,后者与4-
氨基安替比林作用,并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物,其颜色的深浅与ALP活性成正比。
(2)
连续监测法:ALP在碱性条件下,使磷酸对硝基苯酚(4-
NPP)释放出磷酸基团,AMP参与磷酸
酰基的转移,促进酶
反应速率,生成游离的对硝基苯酚(4-NP),并形成黄色的醌,其
吸光度的增高速率与
酶活力成正比。
②20mmol/L磷酸苯二钠溶液:称取
磷酸苯二钠(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中,冷却后加入
氯仿2ml防腐,冰箱保存。此为基质液。
③铁氰化钾溶液:称取
铁氰化钾2.5g,硼酸17g,分别溶于400ml蒸馏水中,混合后加水至1000ml,置棕色瓶内避光保存。出现
蓝绿色应弃去。
④酚标准贮存液(1mg/ml):称取重蒸馏酚1.0g,溶于0.1mol/L
盐酸中,并加至1000ml刻度。也可购买标准液。
①1.8mol/L AMP
缓冲液(pH10.3):称取2-
氨基-2甲基-
1-丙醇(AMP,MW89.14)160g,加1mol/L盐酸320ml混合,加500ml新煮沸已凉的蒸馏水,调pH至10.3±0.02(30℃),并加上述蒸馏水至1000ml,置紧塞瓶中于冰箱保存。
②10.5mmol/L
氯化镁溶液:称取氯化镁(
MgCl2·6H2O,
MW20 3.31)0.21g,溶于水中,并稀释至100ml,室温保存。
③31.5mmol/L磷酸对硝基苯酚溶液(4-NPP):称磷酸
对硝基苯酚二钠盐(含6分子水,MW 371.15)120.8mg,溶于100ml蒸馏水中,置棕色瓶内于冰箱保存。
④底物缓冲液(0.84mol/L AMP,15mmol/L 4-NPP,0.5mmol/L
MgCl2,pH10.3)将AMP、4-NPP和MgCl23种溶液按10∶10∶1混合,37℃预温待用。
碱性磷酸酶是需要经过肝脏,然后由
胆汁排出,当排泄过程中出现异常,那就会引起碱性磷酸酶偏高。