重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液，静置形成可摇散的沉淀。

(1)本疫苗注射时要充分摇匀。

(2)注射部位为上臂三角肌肌内。

(3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。

【制法】取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。

取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。

【鉴别】取本品，照《中国生物制品规程》酶联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其为乙型肝炎表面抗原。

【检查】照《中国生物制品规程》规定的方法检查如下项目。

纯度 不得低于98%。

氢氧化铝 每1ml不得过1mg。

硫柳汞 不得过0.01%。

甲醛 不得过0.01%。

异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。

热原 取本品，依法检查，应符合规定。

无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规定。

【效价测定】取本品，照《中国生物制品规程》测定，应符合规定。

酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得过1.5μg。体外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不低于0.5。

CHO乙型肝炎疫苗的ED50与参比苗的ED50比值不低于1.0。

【类别】亚单位疫苗。

【规格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg

CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg

【贮藏与效期】在2～8℃的暗处保存。有效期2年。

血源乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代工作。

重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表达疫苗。

酿酒酵母（Saccharomyces cervisae）

1982年Valenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美国默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得到美国FDA的批准。1989年7月比利时史克比成公司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。

共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和毕赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表达乙肝疫苗为含HbsAg成份的疫苗。

研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维持9-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往研究证明应用乙肝苗阻断HbsAg、HbeAg双阳性母亲的新一儿传播HBV是评价乙肝疫苗的效力的最直接指标，且1-10岁儿童对乙肝疫苗反应较好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶段结果报告如下：

新生儿：

（1） 母婴传播阻断保护率：应用6批国产量5 μg酵母疫苗对163例HbsAg，HbeAg双阳性母亲的新生儿进行母婴传播阻碍断效果考核，结果保护率在81.48-92.07%之间，远高于文献报道的10 μg（59.2%）和20 μg（74.3%）血源乙肝疫苗,与30 μg血源乙肝疫苗的保护率(85.1%)相当,而进口5 μg M苗(46例,)10 μgA苗(58例)和10 μg S酵母疫苗(30例)的保护率分别为90.33%、86.59%和92.58%。表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和30 μg国产血源乙肝疫苗的保护水平。

（2） 抗体GMT：未发现第一针免后3、9、12月时，HbsAg、HbeAg双阳性孕妇所生新生儿的抗体GMT与HbsAg单阳性及健康孕妇所生新生儿抗体GMT有显著差异。

小学生：

（1） 抗体阳性率：第一针免后1年时，进口酶母疫苗，国产酵母疫苗和国产CHO疫苗抗体阳性率在第一针免疫后3、9、12月均无显著差异。

（2） 抗体CMT比较：第一针免后一年时，进口酶母疫苗（10 μg）和国产CHO疫苗（10 μg）抗体GMT峰值较高，国产酵母疫苗（5 μg）较低。

对应用0、1、6月程序免疫的小学生进行了随访观察。随访年及3年时，2批国产酵母疫苗具有保护性抗体（10mIU/ml）的阳转率分别为81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而进口A和M疫苗分别为90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批国产酵母疫苗抗体GMT分别为123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分别为120.56；67.07和145.75；74.62。

对应用0、1、2月程序免疫的400名小学生进行了免后4年的随访观察，结果3批国产酵产疫苗阳性率分别为87.50%；77.33%；79.49%，而对照M（5 μg）疫苗为91.89,抗体GMT分别为：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗体峰值6月至4年时，3批国产疫苗抗体阴转率分别为7.2；5.26和13.79%，对照M苗为5.17%。无论抗体阳性一率，抗体GMT以及4年抗体阴转率，3批国产疫苗和M苗间增无显著差异。

我们随该结果表明，2批国产酵母乙肝疫苗免后5年时抗体阳性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗体阳性率在81-69%之间。

表明：国产酵母重组乙肝疫苗的免疫效果达到了进口酵疫苗的免疫水平，但抗体阳性率和抗体GMT下降较快，考虑当前乙肝疫苗供应充足，酵母疫苗的加强接种应提到议事日程。

（一）联合疫苗：

联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SB公司的百白破-乙肝四联疫苗、甲-乙肝联合疫苗，MSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。我国全细胞百白破-乙肝四联疫苗和无细胞百白破-乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲-乙肝联合疫苗的开发研究制也在进行。

（二）治疗性疫苗

(1) 现有疫苗增加前S基因或替换现有铝佐剂

研究开发植物来源、细胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐剂，目的在于提高细胞免疫效果，国外已有制品进行临床研究。

(2) DNA疫苗：可以肌肉细胞内表达乙肝表面抗菌原，诱导细胞免疫应答，同时具有长期表达抗原，可减少加强免疫及成本低，储存方便的特点。

(3) 增大剂量酵母疫苗（10 μg/支）的生产：

我国现阶段生产和使用的酵母乙肝疫苗均为5 μg/支，由于以下原因：①、实际应用反映5 μg酵母疫苗的抗体阳性率和滴度较低。②、我们对接种5 μg疫苗的120例成人进行检测，发现免后抗体阳性率和滴度较低，第二针免后1个月时抗体阳性率为70.00%，抗体GMT为9.83；完成全程免疫后1个月时抗体阳性率为80.77%，抗体GMT为151.46。③、MSD疫苗成人剂量为10 μg/支。国内正进行10 μg疫苗的临床考核。此外还应结合临床（血透析，肾脏移植等）和实际需要，生产不同剂量的乙肝疫苗。

（三）对现有疫苗生产线的生产能力进一步开发，以及研制高表达量的新一代重组乙肝疫苗，以降低成本，提高疫苗的覆盖率。

（四）加强疫苗保护机制和免疫持久性的研究。

所有的孕妇在早期产前检查时应常规检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。乙型肝炎表面抗原阳性的孕妇应在妊娠后期再查乙型肝炎e抗原(HBeAg)。如果乙型肝炎表面抗原为阳性，在分娩前就要准备好乙肝疫苗。同时要问清楚婴儿出生后能否在24小时内进行疫苗注射，第2针和第3针在什么地方注射等问题。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)双阳性母亲的婴儿，如无异常，应在出生后6—12小时内肌内注射1支高效价乙肝免疫球蛋白，生后1个月再注射1支高效价乙肝免疫球蛋白(≥100单位/毫升)。2、3、6月龄时各注射1支20微克的乙肝疫苗。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性而乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性母亲所生新生儿，应在0(出生后24小时内)、1、6个月龄分别以10微克、10微克、10微克的剂量接种乙肝疫苗。在不具备检查乙型肝炎e抗原(HBeAg)条件的地区，对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性母亲的新生儿，均应按双阳性者接种疫苗。

不具备检查乙型肝炎表面抗原(HBsAg)条件的地区，应对所有新生儿在0、1、6月龄分别以10微克、10微克、10微克的剂量接种疫苗。