转染 ,是将
外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。
电穿孔法、
显微注射和
基因枪属于通过
物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、
脂质体转染方法、和多种
阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的
原生质体转染,比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、
细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术,是转染效率最高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。
需要指出的一点,无论采用哪种转染技术,要获得最优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多,从细胞类型、
细胞培养条件和
细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。
阳离子
脂质体表面带正电荷,能与核酸的
磷酸根通过
静电作用,将
DNA分子包裹入内,形成
DNA脂复合物,也能被表面带
负电的
细胞膜吸附,再通过融合或细胞
内吞进入细胞。
脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是实验室最方便的转染方法之一,其
转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过
24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是
电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高
电场强度会杀死50%-70% 的细胞。针对
细胞死亡开发出了一种电转
保护剂,可以大大的降低细胞的
死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
2. 选择合适的
混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的
无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者
EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的
转染试剂,再次震荡。
6. 到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入
完全培养基继续培养24-48小时。